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宫颈癌组织中端粒酶活性测定_医学论文 宫颈癌组织中端粒酶活性测定_医学论文 作者：石梅　苏明权　杨秀芝　马海昕　张歌萌 【关键词】 ,PCR-TRAP 　　关键词: PCR-TRAP宫颈肿瘤端粒，末端转移酶 　　摘 要:目的 探讨端粒酶活性在子宫颈癌组织发生发展中的作用及临床应用价值. 方法 采用PCR-TRAP微孔杂交法检测45例子宫颈癌组织标本和8例正常的子宫颈组织的端粒酶活性. 结果 45例宫颈癌组织中端粒酶阳性表达率为86.6%，其中宫颈癌Ⅰ期27例，阳性率77.7%，宫颈癌Ⅱ期12例，阳性率100%，宫颈癌Ⅲ期6例，阳性率100%.8例正常宫颈组织中未检测出端粒酶阳性者. 结论 端粒酶活性表达在子宫颈癌的发生发展中起重要的作用，端粒酶活性检测对指导宫颈癌的诊断和治疗具有重要意义. 　　Keywords:PCR-TRAPcervix neoplasmstelomerase 　　Abstract:AIM To investigate the role of telomerase activity in the occurrence and development of cervical carcinoma and its clinical value.METHODS PCR-TRAP was employed to detect the activity of telomerase in45cervical carcinoma spec-imens and8normal cervical neck tissues.RESULTS Rate of telomerase positive expression in45cases of cervical carcino-ma was86.6%.Nine cases fell into phaseⅠof cervical car-cinoma，positive rate77.7%.Four fell into phaseⅡ，posi-tive rate100%.Two fell into phaseⅢ，positive rate100%.Detecting showed none of the8normal cervical neck tissues was positive for telomerase.CONCLUSION Telomerase ac-tivity expression may play an important role in the occurrence and development of cervical carcinoma.Detection of telom-erase activity is of significance to guiding diagnosis and treat-ment of cervical carcinoma. 　　0 引言 　　端粒是真核细胞染色体末端的特殊结构，有重要的生物学功能，端粒酶是使端粒延伸的反转录DNA聚合酶，是由RNA和蛋白质组成的核糖核酸蛋白质酶，蛋白质组分具有催化活性，以RNA组分为模板，以端粒3’末端为引物，合成端粒重复序列［1］ .1994年Kim等［2］ 利用PCR技术建立了高敏感的TRAP（Telomeric repeat amplification protocol）端粒酶活性测定方法，并广泛应用于恶性肿瘤的端粒酶活性研究.我们通过（PCR-TRAP）微孔杂交法检测宫颈癌（Cervical carcinoma，CC）组织中端粒酶活性的表达，旨在了解端粒酶在CC发生发展中的作用. 　　1 材料和方法 　　1.1 组织标本来源 1999-04/1999-09在我院住院的宫颈癌患者45例，均经活检确诊，其中Ⅰ期27例，Ⅱ期12例，Ⅲ期6例，所有病例符合1995年制定的FIGO标准鳞癌36例，腺癌9例.获取的新鲜组织标本立即置-20℃冻存，选取8例全子宫切除者的正常子宫颈组织作对照. 　　1.2 端粒酶TRAP┐Hyb Kit 购自华美生物工程公司，试剂盒内均设有内参标准对照. 　　1.3 端粒酶的提取 手术切除的宫颈癌组织50mg，置液氮速冻后用组织研磨器研成粉末，PBS缓冲液洗涤1次，600g离心1min，弃洗液，加入100μL预冷的裂解液（10mmol#12539L-1 Tris#12539HCl pH7.51mmol#12539L-1 MgCl2 1mmol#12539L-1 EGTA5mmol#12539L-1 二巯基乙醇5g#12539L-1 CHAPS｛3-［（3-胆酰胺丙基）-二乙胺］-丙磺酸｝100g#12539L-1 甘