更年平调液对更年期大鼠心肌细胞Bcl_药学论文.docVIP

更年平调液对更年期大鼠心肌细胞Bcl_药学论文 更年平调液对更年期大鼠心肌细胞Bcl_药学论文 【关键词】 更年平调液；,,心肌；,,更年期大鼠；,,bcl 　　摘 要： 目的： 探讨更年平调液对更年期大鼠心肌细胞保护作用的机制。方法： 选用鼠龄为11～15个月的自然更年期雌性SD大鼠共40只, 随机分为4组,即更年平调液组(P组)、更年期对照组(M组)、乙烯雌酚组( E组)及更年康组(G组) ,每组10只。另选鼠龄为4～6 个月,体重130～180 g的SD大鼠10只,为青年对照组(Y组)。实验第45d,采用免疫组织化学方法检测各组心肌组织中Bcl2的表达水平，利用计算机图像分析技术测量各组心肌组织中Bcl2表达的平均光密度和平均阳性面积。结果：更年平调液组与更年期对照组、乙烯雌酚组及更年康组之间，Bcl2的平均光密度及阳性面积率有显著性差异(P＜0.01），更年平调液组与青年对照组比较平均光密度及阳性面积率的差异无显著性(P＞0.05)。结论： 更年平调液能抑制心肌细胞凋亡而对心肌细胞起着重要的保护作用。 　　关键词： 更年平调液； 心肌； 更年期大鼠； bcl2； 凋亡； 免疫组织化学 　　更年期综合征即祖国医学的绝经前后诸症,是更年期妇女发病率最高的一种病症，多发于45～55岁妇女。更年期综合征是妇女进入更年期，卵巢功能开始衰退后出现的病症。临床表现除月经紊乱外,还有烘热出汗、胸闷烦躁、头昏心慌、失眠多梦或精神抑郁、焦虑忧愁等一系列症候群［1，2］。更年期平调液经多年临床应用已证实能明显改善更年期妇女的心血管症状,减慢心率,改善心室功能［1,2］，但作用机理尚未阐明。本研究则采用免疫组织化学方法,观察了平调液对更年期大鼠心肌组织内bcl2的表达，以此研究更年平调液对更年期大鼠心肌保护作用的机理。 　　1 材料与方法 　　11 动物分组及处理选用鼠龄为11～15个月的自然更年期雌性SD大鼠, 体重250～350g,并经阴道细胞涂片,证实属更年期者共40只,作为本研究的实验模型。40只更年期动物随机分为4组：即更年平调液组(P组) 、更年期对照组(M组) 、乙烯雌酚组(E组) 及更年康组(G组) ,每组10只。另选鼠龄为4～6个月,体重130～180 g的SD大鼠10只,为青年对照组( Y组)。各组动物处理如下：①更年平调液组：更年平调液制剂(W／V =180 %) ,20 ml／kg 体重,相当生药30 g／kg 体重,每日一次灌胃,连续45 d；②更年期对照组：生理盐水灌胃,20 ml／kg体重,用法同前；③乙烯雌酚组：乙烯雌酚片剂溶于水,浓度为1. 25 g／L ,用量为20 ml／kg体重,用法同上；④更年康组:更年康片剂溶于水,成3 %浓度,用量为20 ml／kg体重,相当生药0. 6 g／kg体重；⑤青年对照组:处理方法同更年期对照组。实验结束后,取各组心肌组织做免疫组织化学实验。 　　12 实验用药剂①更年平调液由枸杞、肉芙蓉、制首乌、女贞子及龙齿等12 味中药组成,由武汉大学中南医院药厂配制成180 %(W/ V) 制剂；② 更年康片:为石家庄新华制药厂产品,批号9005112 ；③乙烯雌酚片:为广州济光制药厂产品,批号900803 。 　　13 免疫组织化学 　　131 主要试剂 ① 浓缩型鼠抗人Bcl2单克隆抗体（美国Santa Cruz公司）；② 超敏即用型SP通用型免疫组织化学试剂盒（福州迈新公司）；③ DAB显色试盒及多聚赖氨酸（北京中山生物技术有限公司）。 　　132 主要仪器 YWY781型医用微波仪（250W，50Hz），浙江临安电子器材厂生产；家用高压锅。 　　14 方法 　　141 免疫组织化学SP法检测Bcl2相关抗原 主要步骤：① 组织切片5 μm，常规脱蜡至水，蒸馏水洗；② 3%过氧化氢，37℃孵育10 min以抑制内源性过氧化物酶活性，PBS洗4×5min；③ Bcl2采用微波抗原修复（3档，10 min），PBS洗4×5min；④ 正常羊血清37℃孵育10 min以减少非特异性反应；⑤ 一抗（Bcl2，1:50)37℃孵育1 h，PBS洗4×5min；⑥ 生物素标记的二抗，37℃孵育10 min，PBS洗4×5min；⑦ 链霉菌抗生物素蛋白过氧化物酶复合物37℃孵育10 min，PBS洗4×5min；⑧ DAB显色液显色，自来水冲洗终止反应；⑨ 苏木精复染，脱水，透明，封片。用PBS代替一抗作为阴性对照组，人扁桃体作为Bcl2的阳性对照组。 　　142 免疫组织化学结果判断Bcl2胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反应。阴性对照组除细胞核染成蓝色外，胞核和胞浆内无棕黄色反应物。采用HPIAS2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统（同济千屏影像公司）对Bcl2的表达进行定量分析，每张切