河南汉族人群eNOS基因27 bp VNTR, G894T多态性与深静脉血栓形成的相关性分析_医学论文.docVIP

河南汉族人群eNOS基因27 bp VNTR, G894T多态性与深静脉血栓形成的相关性分析_医学论文 河南汉族人群eNOS基因27 bp VNTR, G894T多态性与深静脉血栓形成的相关性分析_医学论文 作者：杨冬之 贺颖 于辉 赵洛沙 郑红 【摘要】 目的：探讨内皮细胞型一氧化氮合酶（eNOS）基因27 bp VNTR，G894T基因多态性与深静脉血栓形成（DVT）的相关关系. 方法： 运用PCR方法对103例DVT患者和250例健康对照进行eNOS基因27 bp VNTR，G894T多态性的检测分析，并进行基因型频率及等位基因频率的比较以及单倍型分析. 结果： 4a/4a基因型频率的分布以及4a等位基因频率的分布在DVT组与对照组差异有统计学意义（0.05）；相对风险分析发现，携带4a等位基因的个体发生DVT的危险性增加；OR=1.950，95%CI为1.128～3.371. 4a两种单倍型组合在DVT组与对照组比较，差异具有统计学意义（0.05）. 对eNOS基因4a/b和G894T做配对连锁不平衡检验，D′=0.681，r2=0.003. 结论： 提示27 bp VNTR多态性与深静脉血栓形成相关，携带4a等位基因者可能具有易患静脉血栓的危险性；4a可能是河南汉族人DVT发生的风险单倍型，而4b可能对河南汉族人群DVT的发生具有某种保护作用. 4a/b和G894T 之间不具有连锁不平衡. 【关键词】 一氧化氮合酶 基因多态性 可变串联重复序列 　　0引言 　　深静脉血栓形成（deep venous thrombosis, DVT）的机制异常复杂，通常大型手术、骨折、肥胖、老龄、妊娠、口服避孕药等因素为其外在诱因，遗传性缺陷则是其形成的内在因素. 近年来，血栓遗传易感基因和遗传风险因子的研究成为该领域新的研究热点［1-2］. 一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）催化L精氨酸的氧化反应生成一氧化氮（nitric oxide，NO），NO可介导平滑肌细胞舒张，是调节血管张力的重要信使分子. 目前在哺乳动物中已经发现三种NOS的同工酶，分别为神经源型NOS(neuronal NOS,nNOS),诱导型NOS(inducible NOS, iNOS)和内皮细胞型NOS(endothelial NOS, eNOS)［3］. 有研究表明［4］内皮细胞型NOS基因（eNOS）存在基因多态性，其中第4内含子的一个27 bp的插入/缺失多态性以及第7外显子894位碱基G的突变（G894T）可能影响eNOS蛋白的功能及活性，降低NO的生成量，加速动脉粥样硬化的发展，与血栓性疾病及心脑血管疾病密切相关. 我们应用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction方法对103例深静脉血栓形成（deep venous thrombosis, DVT）患者及250例正常对照进行eNOS基因27 bp数目可变的串联重复序列（variable number of tandem repeat, VNTR)和G894T基因多态性的检测，探讨这些遗传多态因子与深静脉血栓形成之间可能的相关性. 　　1对象和方法 　　1.1对象 　　经患者同意，选取2002在郑州大学第一附属医院与河南中医学院第一附属医院门诊和住院的深静脉血栓形成（DVT）患者103(男65，女38)例,年龄（48.3±4.8）岁, 来自河南省不同地区. DVT诊断均经静脉造影确诊. 正常对照250(男142，女108)例,年龄（42.2±10.2）岁,为郑州血液中心的健康献血者. 经详细病史询问，体格检查及实验室检查均未见异常，并排除有心血管病、高血压或糖尿病家族史者. 本研究人群个体之间无血缘关系，均为河南汉族人群. 　　1.2方法 　　1.2.1DNA提取抽取DVT患者与正常对照 　　静脉血3 mL，EDTA抗凝，用常规酚/氯仿方法提取基因组DNA，其含量用紫外分光光度计测定. 　　1.2.2PCR扩增目的片段 　　27 bp VNTR引物参照Wang等［5］ 设计，由上海生工合成，其核苷酸序列为：引物forward: 5′GG CCC TAT GGT AGT GCC TTT3′, 引物reverse: 5′引物参照Hingorani等［6］设计forward: 5′反应体系为25 μL,其中含PCR缓冲液2.5 μL,上下游引物各2 μL，样本DNA 1.5 μL，Taq DNA聚合酶0.3 μL (1 U)，加去离子水至25 μL. PCR扩增条件：95℃热启动5 min，95℃变性1 min, 59℃退火1 min, 72℃延伸1 min共35个循环后，72℃延伸10 min后冷却至4℃.