温通针法对脑梗塞大鼠血小板膜糖蛋白CD62P和CD63的影响_医学论文.docVIP

温通针法对脑梗塞大鼠血小板膜糖蛋白CD62P和CD63的影响_医学论文 温通针法对脑梗塞大鼠血小板膜糖蛋白CD62P和CD63的影响_医学论文 作者：杨波 高洋 严兴科 郑魁山 【摘要】 目的探讨温通针法对急性脑梗塞大鼠血浆糖蛋白含量的影响。方法选用健康Wistar大鼠，用线栓法直接阻断大鼠大脑中动脉制作急性脑梗塞模型，采用流式细胞仪测定脑梗塞大鼠血浆CD62P和CD63的含量。结果造模后脑梗塞组血浆CD62P，CD63均较假手术组显著升高；两治疗组血浆CD62P，CD63均 较梗塞组显著降低，且温通针法较捻转针法降幅更为显著。结论针刺可以通过降低脑梗塞大鼠血浆糖蛋白含量，从而阻止或抑制血小板活化，达到防治脑梗的目的，而温通针法的作用优于捻转针法。 【关键词】 1.长春中医药大学针灸推拿学院，吉林长春 130117； 2.甘肃中医学院，甘肃 兰州 730000 针刺在治疗脑源性疾病方面疗效显著，尤其是对急性脑梗塞的治疗，日益引起重视。多年的基础研究和临床实践表明，针刺在治疗脑梗塞等缺血性中风方面疗效显著，但传统针刺手法治疗该病的研究则鲜见报到。导师郑魁山教授数十年来运用独创的“温通针法”在临床治疗缺血性卒中方面取得满意的疗效，表明其对脑梗塞是有效的。血小板活化在缺血性脑损伤中起重要作用，而CD62P和CD63作为血小板活化的分子标志物，能够反映血小板被激活的程度［1］。为进一步探讨传统针法防治脑梗塞的机理，进行如下实验观察。 1 材料与仪器 1.1 动物 Wistar大鼠48只，雌雄各半，体重（230±20）g，由兰州医学院实验动物室提供。分组：实验前适应性喂养3天后将48只大鼠随机分为：假手术组、中动脉梗塞组（简称梗塞组）、捻转补法组（简称捻转组）、温通针刺组（简称温通组），（每组12只）。 1.2 器材低温超速离心机（Heracus）FACS Calibun型流式细胞仪［美国Becton Dickinsua公司］；血小板单克隆荧光抗体（Inmunototach公司）。 2 方法 2.1 急性脑梗塞大鼠模型复制参考文献［2，3］复制并改良脑梗塞模型。大鼠以20％乌拉坦（7m1/kgbw）腹腔注射麻醉，仰卧位固定，颈正中切口，仔细分离、结扎右颈总动脉、颈外动脉及其分支，分离右侧颈内动脉（Internal Carotid Artery,ICA），近段备线，远端放置动脉夹。于颈总动脉上距分叉处0.5cm处切口。插入1.5号尼龙线（头端涂以硅胶，使成为直径约0.25mm左右，具备一定弹性和硬度）18～20mm，使线栓进入ICA，穿过大脑中动脉（Middle Cerebral Artery, MCA），起始段至大脑前动脉近端，阻断MCA的所有血液来源，结扎备线，减去多余线头，缝合皮肤。在手术结束，麻醉清醒后，观察神经症状，按照Kuluz神经缺陷三级评分表［4］，选择符合条件者，即行走时身体向偏瘫侧转圈者作为观察对象。假手术组只分离ICA而不用线栓阻塞MCA血流。 2.2 腧穴的选取、定位及针刺方法 腧穴的选取、定位：根据郑魁山教授治疗中风的经验选取人中、足三里（双），参照《实验针灸学》［5］“大鼠常用针灸穴位定位标准”定位取穴。 针刺方法： 温通针法，参照郑氏温通法进行操作［6］。 捻转补法，参照教材［7］标准进行。每穴操作90s。捻转组于造模即刻、造模后3h各行捻转针法1次，温通组于造模即刻、造模后3h各行温通针法1次，以上每穴操作90s；假手术组、脑梗塞模型组不予处理。 2.3 观察指标和方法各组大鼠于治疗结束后空腹采取静脉血1ml，加消炎痛－EDTA溶液100μl抗凝，于低温超速离心机（3500r/min）离心20min，分离血小板血浆，调整血小板浓度为300×109/L，加入20μl血小板单克隆荧光抗体（Immunototech公司）即CD62P和CD63，分别与50μl血小板血浆混匀，室温下反应20 min加入0.5ml PBS液，用FACS Calibur型流式细胞仪（美国Becton Dickinson公司）进行检测。用Cell Quest软件进行样本收集和数据分析，全部数据以±s表示，多组比较采用F检验和q检验进行统计学分析。 3 结果 各组动物血小板膜糖蛋白CD62P和CD63含量比较。结果见表1。表1 各组动物血小板膜糖蛋白CD62P和CD63含量比较 与假手术组比较 ●0.01；与脑梗塞组比较 Δ0.01；与捻转组比较 ▲0.05， ▲▲0.01 表1说明，造模后脑梗塞组血浆CD62P，CD63均较假手术组显著升高；而两治疗组治疗后血浆CD62P，CD63 较脑梗塞组显著下降；而且温通组与捻转组相比，其治疗作用更为明显，特别是CD62P差异有非常显著意义。 4 讨论 4.1 脑梗塞的病