猫抓病的实验室诊断研究进展_医学论文.docVIP

猫抓病的实验室诊断研究进展_医学论文 猫抓病的实验室诊断研究进展_医学论文 猫抓病(cat scratch disease，CSD)是一类典型的良性、自限性淋巴管疾病，主要是通过猫的抓伤和咬伤而感染，也可通过跳蚤的叮咬传播。儿童和青年人发病较多，少数病人尤其是免疫力低下的病人如人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者可表现较为严重的并发症〔1〕。目前已经证实，汉赛巴尔通体(Bartonella henselae)是导致猫抓病的主要病原体，其储存宿主是猫；也有关于五日热巴尔通体(B quintana)和克氏巴尔通体(B clarridgeiae)感染导致猫抓病的报道〔2〕。美国Jackson等通过流行病学研究，推算每年大约有24000例CSD新发病例〔3〕。由于猫抓病临床表现复杂多样，且无特征性临床表现，诊断较为困难，必须借助实验室辅助诊断才能够确诊。猫抓病的诊断标准至少包括3个方面：(1)有猫接触或猫抓伤史；(2)猫抓伤处皮肤测试阳性；(3)局限性淋巴管炎并排除其他原因的淋巴管炎，淋巴活检有典型的组织病理学损伤。本文主要对国外猫抓病的实验室诊断方法及其研究进展综述如下。 　　1 汉赛巴尔通体分离培养 　　汉赛巴尔通体是一类革兰阴性、氧化酶阴性、营养条件要求苛刻的需氧杆菌。镜下观察可看到一群微小的、弯曲状的革兰阴性棒状小体。巴尔通体可在37℃含5％CO2的血培养基(如含5％羊血的胰酶大豆琼脂、巧克力琼脂、脑心浸液琼脂等)上生长，也可在含小牛血清的肉汤及组织中培养。巴尔通体在血琼脂培养基上生长缓慢，一般培养12～14d才能看到典型的菌落生长，有时需45d。菌落呈灰白色圆形突起，边沿光滑或粗糙，接种环刮起后可见圆形小坑，是巴尔通体菌落向培养基中下陷生长的现象〔4〕。在传代培养阶段，通常只需3～5d就长出克隆菌落。适合分离巴尔通体的标本有血液、淋巴组织、吸出物、皮肤及其他器官的活检标本。对于无其他临床症状的CSD病人来说，淋巴标本要优于血液标本。对于反复发烧、心内膜炎、杆菌性血管瘤(Bacillary Angiomatosis，BA)，肝紫癜(Peliosis hepatitis，PH)及其他系统损伤的病人来说，血培养的效果较好。对于血液和淋巴标本来说，细胞培养也证明是有价值的方法。 　　2 PCR检测核酸扩增技术的应用，尤其是广谱PCR技术和基因测序已经成功用于检测和确诊巴尔通体感染。为评估PCR方法的检测效能，Sophie W等〔5〕用特异性引物对46名临床确诊的CSD病人进行htrA基因的PCR扩增,结果45份扩增出414bp的阳性片断，灵敏度高达98%，特异度100%(41/41)。而Hansmann〔6〕用同样的引物对临床CSD病人的淋巴标本进行PCR检测，灵敏度仅76%。通过对汉赛巴尔通体16S rRNA编码基因进行分析，可区分出2种不同的基因型即Houston-1和Marseille型〔7〕，同时也代表了人类分离株的2种不同的血清型(Houston ⅠMarseille Ⅱ型)〔8〕。另外，柠檬酸合成酶基因(gltA)、16S核糖体DNA(rDNA)、DNA指纹印迹分析如重复序列聚合酶联反应(REP-PCR)和肠杆菌基因间重复序列PCR(ERIC-PCR)等也可用于区分汉塞巴尔通体的2种基因型。Hsp60基因groEL〔9〕和rpoB〔10〕的序列变异可在种水平上区分出汉塞巴尔通体及其2种不同的基因型。Zeaiter等〔11〕分别用起源于基因间隔区(ITS)、groEL及pap31序列的3对特异性引物对临床确诊的CSD病人的淋巴活检标本进行PCR检测，扩增出3种特异性基因片断，证明ITS引物种属水平上检测巴尔通体，groEL引物则可区分出2种不同的汉赛巴尔通体即Houston-1和Marseille型，而pap31引物则能更详细的区分出4种不同的汉赛巴尔通体亚型即Marseille,CAL-1,Houston-1和1种新的变异性ZF-1。但PCR方法尚存在很大缺陷，如PCR引物结合缺乏特异性，实验室污染等。 　　3 血清学方法分离巴尔通体通常既耗时又不易成功，PCR在检测临床样品时可作为一种快速特异的病原检测方法，但需要适当的实验设备和器材。对于许多临床实验室来说，确诊临床可疑CSD最实用的诊断方法是血清学检测。 　　31 免疫荧光抗体检测(IFA) 汉赛巴尔通体作为CSD的主要致病菌，主要是依靠IFA的血清学方法进行检测。汉赛巴尔通体易于自动黏附，这种细菌成簇的现象会阻碍产生分散的全菌抗原，血清学检测的灵敏度因不同实验室而异，从100%到30%以下不等〔12〕，在预测IFA诊断效能的早期报道中,用汉赛巴尔通体IgG≥1∶64的滴度检测CSD,灵敏度为84%(38/45),特异度为96%(108/112)。另一项研究表明，对于