玉郎伞多糖对肝星状细胞氧应激脂质过氧化作用的影响_药学论文.docVIP

玉郎伞多糖对肝星状细胞氧应激脂质过氧化作用的影响_药学论文 玉郎伞多糖对肝星状细胞氧应激脂质过氧化作用的影响_药学论文 作者：黄必义，黄仁彬，卢曦，段小群 【摘要】 　　目的 研究玉郎伞多糖(YLS)对肝星状细胞（HSC）氧应激脂质过氧化作用的影响及机制。方法用H2O2诱导肝星状细胞脂质过氧化，测定细胞培养上清液中MDA，SOD水平，MTT法测定肝星状细胞的增殖，LDH法检测YLS对肝星状细胞的毒性作用，ELISA法测定I型胶原含量。结果YLS （25～200μg/ml）可明显降低培养上清液中MDA含量和I型胶原水平，抑制肝星状细胞的增殖，提高SOD活力，并呈剂量依赖性。结论 YLS对肝星状细胞的增殖及I型胶原的合成具有抑制作用，该作用可能与其抗氧化作用有关。 【关键词】 玉郎伞多糖 肝星状细胞 I型胶原 　　Abstract：ObjectiveTo study the effects and its mechanism of Yulangsan polysaccharide(YLS) on the proliferation and collagen I production of hepatic stellate cell（HSC）induced by oxidative stress. MethodsThe lipid peroxidation of HSC was induced by H2O2.The levels of malondialdehyde(MDA) and SOD in cultural supernatant were determined by general methods.Cytotoxicity was measured by LDH method.The proliferation of hepatic stellate cells was measured by MTT method. The content of collagen I was measured by ELISA method.ResultsYLS （25～200μg/ml）concentration-dependently decreased the levels of MDA and collagen I and the number of proliferating HSC ，and increased the activity of SOD . ConclusionYLS can inhibit the proliferation and collagen I production of hepatic stellate cell induced by oxidative stress. This might be associated with the anti-oxidative activity of YLS. 　　Key words：Yulangsan polysaccharide； Hepatic stellate cells； Collagen I 　　玉郎伞是一种尚未开发利用的民间草药，为蝶型花科植物疏叶岩豆 Millettia pulchra Kurz var.laxior(Dunn)Z Wei 的块根，具有散淤、消肿止痛之功能，民间用于高血压病、肝炎、消化不良等疾病的治疗。本课题组多年研究证实玉郎伞提取物具有抗氧化和免疫调节作用，并对急、慢性实验性肝损伤均有明显的保护作用［1，2］。玉郎伞多糖（Yulangsan Polysaccharide，YLS）是玉郎伞提取物中主要的有效成分，为进一步研究YLS对肝纤维化的作用，本研究用H2O2诱导肝星状细胞脂质过氧化［3］，观察YLS对体外培养大鼠肝星状细胞增殖和I型胶原分泌的影响及机制，以探讨YLS抗肝纤维化的机制。 　　1 材料与仪器 　　1.1 细胞来源肝星状细胞系为HSC-T6，为SV40转染SD大鼠HSC。 　　1.2 药物及试剂 　　YLS，由本室自行提取（分离得到的YLS多糖经Sephadex-75凝胶柱层析，硫酸-苯酚法以及高效凝胶渗透色谱法证实为单一多糖，紫外扫描显示无核酸和蛋白特征吸收峰，薄层色谱和气相色谱表明由葡萄糖和阿拉伯糖组成，红外光谱显示有典型的多糖吸收峰。）；RPMI-1640(Gibco公司)；胎牛血清(杭州四季青公司)；H2O2(重庆川江化学试剂厂)；丙二醛(MDA)，SOD，LDH试剂盒（南京建成生物工程研究所）；噻唑蓝（MTT，Amerisco，北京拜尔迪生物公司分装）；I型胶原试剂盒（美国BPB公司）。 　　1.3 仪器 　　CO2恒温培养箱（美国Thermo Forma，Model 311）；TDL80-2B台式