玉竹提取物A对1型糖尿病小鼠血糖及细胞因子的调控作用_医学论文.docVIP

玉竹提取物A对1型糖尿病小鼠血糖及细胞因子的调控作用_医学论文 玉竹提取物A对1型糖尿病小鼠血糖及细胞因子的调控作用_医学论文 作者：金艳书 庄晓燕　吴学敏 李宏伟　刘运芝 【关键词】 玉竹 　　摘要：目的：研究1型糖尿病（DM）的发生与细胞因子作用的关系及玉竹提取物A（EAPAOA）对链脲佐菌素（STZ）诱导的1型糖尿病小鼠（下称STZ小鼠）血糖和细胞因子的影响。 方法：昆明小鼠60只，对EAPAOA进行急性毒性实验。采用STZ小剂量多次注射诱导1型糖尿病小鼠模型，正常对照组与DM对照组各1组，实验组分三个剂量腹腔注射等体积EAPAOA ，用药4周监测血糖变化，4周后应用ELISA法检测外周血血清IL4、IL10、IFNγ含量。结果： 急性毒性实验显示EAPAOA毒性作用很低，LD50=14.5124g/Kg；DM对照组与正常对照组比较IL4、IL10降低，IFNγ升高；实验组与DM对照组比较血糖明显降低，IL4、IL10升高，IFNγ降低。结论：1型DM的发生与细胞因子IL4、IL10降低，IFNγ升高有关，EAPAOA安全范围大，可调节STZ小鼠发病过程中细胞因子水平，干预1型DM发生发展。 　　关键词： 1型糖尿病；玉竹提取物 A；急性毒性实验；细胞因子 　　1型糖尿病（diabetes mellitus，DM）是胰岛β细胞进行性损害和胰岛素分泌不足的自身免疫性疾病，其详细的发病机理尚未完全阐明。一般认为其发病除了与遗传因素、环境因素有关外，免疫应答是启动因素，表现为细胞免疫和体液免疫均有异常，而细胞因子在此过程中可能起着主导作用［1,2］。 　　玉竹（Polygonatum Odoratum （Mill.）Druce）为百合科黄精属中草药，含有多糖、生物碱、甾体皂甙等。玉竹的干燥根茎，性平、味甘，具养阴、润燥、除烦、生津止渴等功效,有强心、扩张血管、降血糖、降血脂、和抗肿瘤等作用［3~5］。本实验所采用的玉竹提取物A（extraction A of polygonatum odoratum, EAPAOA）是玉竹的干燥根茎经水醇法（30%乙醇）提取而得，通过观察它对STZ小鼠血糖血清IL4、IL10、IFNγ水平的影响，旨在探讨EAPAOA对STZ小鼠血糖和细胞因子的调控作用。 　　1 材料和方法 　　11 材料 　　111 实验动物 　　昆明小鼠60只，雌雄各半，体重18~20g ；C57BL小鼠50只，雄性，体重18~20g,购自中国医科大学实验动物中心。 　　112 主要试剂 　　EAPAOA：玉竹产自锦州凌海市温滴楼乡，将2.5Kg玉竹干燥根茎洗净、去须根、切碎，30%乙醇浸提，G4过滤分离，旋转蒸发仪蒸发回收乙醇，得黄棕色沉淀烘箱干燥后成780g浸膏备用，使用前分别配制成所需浓度的溶液，高压灭菌。STZ（美国sigma公司）；小鼠IL4、IFNγ试剂盒（进口分装，北京晶美公司）；小鼠IL10试剂盒（原装进口，美国Bender MedSystems公司）；血糖试纸（美国强生公司）；尿糖试纸（广州越秀东方新科技研究所研制生产）。 　　113 主要仪器 　　血糖仪（OneTouchI型血糖仪，美国强生公司）；酶标仪（DG3022A型，上海）。 　　12 实验方法 　　121 急性毒性试验 　　60只重约18~20g的健康昆明小鼠(雌雄各半)随机分成6组，每组10只，每只腹腔注射相应剂量的EAPAOA 0.5ml。一次性给药后即刻观察中毒症状并记录死亡动物只数。 　　122 实验动物分组及动物模型制备 　　将50只C57BL小鼠随机分为5组，其中实验组分为3个剂量组，以近似LD50 1/15剂量的1g/Kg作为基础给药量，另取其2倍、4倍量，即：1g/Kg(EAPAOA1组)、2g/Kg（EAPAOA2组）、4g/Kg（EAPAOA3组）；设正常对照组（control）和糖尿病对照组(DM)，每组10只。应用0.1mol/l枸橼酸钠缓冲液（pH4.4）配制成0.4％STZ溶液，按40mg/Kg剂量腹腔注射，每天1次，连续5天，每周分别测血糖、尿糖1次，动态监测1型DM模型的形成，除正常对照组小鼠外（只注射等体积枸橼酸钠缓冲液），其余组制备1型DM模型，以血糖≥11.4mmol/l，尿糖+++以上2周，为模型制做成功［6］。低于此值弃去。小鼠自由饮食、饮水，不限量、标准饲料（锦州医学院实验动物中心提供）。正常对照组与DM对照组，腹腔注射生理盐水0.5ml，每日1次，共4周；EAPAOA1组EAPAOA 1g/Kg、EAPAOA2组EAPAOA 2g/Kg、EAPAOA3组EAPAOA 4g/Kg，分别以等体积0.5ml腹腔注射，每日1次，共4周。 　　123 血糖、尿糖测定 　　空腹血糖测试采用末梢全血快