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白细胞介素┐2mRNA在大鼠垂体前叶的表达_医学论文 白细胞介素┐2mRNA在大鼠垂体前叶的表达_医学论文 作者：韦耿泽　朱运龙　王高峰　韩雪峰　胡玉珍　钟延清　陈健康 【关键词】 白细胞介素-2 　　关键词: 白细胞介素-2垂体前叶逆转录-聚合酶链反应鼠 　　摘 要:目的 研究白细胞介素-2（IL-2）mRNA在正常大鼠垂体前叶的表达. 方法 从正常大鼠垂体前叶组织和离体原代培养的细胞中提取总RNA，采用二步法RT-PCR技术，扩增出相应大小的DNA片段，将此片段通过凝胶电泳回收纯化后与pGEM-T easy载体连接，转染到大肠杆菌细胞内，并接种于LB培养基中培养10～14h，挑选出阳性克隆进行DNA序列测定. 结果 测定的DNA与IL-2基因片段相同.因而，在正常大鼠垂体前叶组织和培养细胞中都有IL-2mRNA的表达. 结论 首次证实了IL-2不仅存在于垂体肿瘤组织中，而且在正常垂体组织中也有表达.为进一步研究神经内分泌网络学说提供了一定的理论基础. 　　Keywords:IL-2anterior pituitaryRT-PCRrats 　　Abstract:AIM To study the expression of IL-2mRNA in rat normal anterior pituitary.METHODS Total RNA was extracted from rats’normal anterior pituitary tissues and pri-mary cultured cells in vitro.Using the two-step RT-PCR technique，we amplified a DNA fragment in comparatively the same length as that of IL-2mRNA.Through DNA a-garose gel electrophoresis，the fragment was purified and then connected with pGEM-T easy plasmid by the T4ligase.The connected plasmid was transformed into the E.coli cells. The transformed cells were planted in the Amp+LB culture medium and cultured for10～14h.The positive clones were selected and then the DNA sequencing was conducted.RE┐SULTS The DNA sequence was the same as that of the IL-2gene fragment.Therefore，there existed IL-2mRNA in rats’normal anterior pituitary tissues and cultured cells.CON┐CLUSION It is proved，for the first time，that IL-2not on-ly exists in the tissues of pituitary adenoma，but is also ex-pressed in the normal pituitary tissues. 　　0 引言 　　白细胞介素-2（IL-2）对下丘脑-垂体-靶腺具有明显的调节作用.外源性IL-2既可以直接作用于垂体组织，影响垂体激素的分泌，也可以通过调节下丘脑促垂体激素的释放，间接影响垂体激素的分泌［1，2］ .近来发现，垂体瘤细胞在基础条件和不同的刺激条件下可以产生和分泌IL-2［3］ ，但是正常垂体组织是否存在IL-2还未见报道.我们拟应用RT-PCR方法，从基因水平确定大鼠正常垂体前叶中是否有IL-2表达. 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 胰蛋白酶为Difco公司产品，DMEM培养基及Trizol试剂为美国Gibco公司产品，新生小牛血清为杭州四季青生物工程材料研究所产品，反转录试剂盒、PCR反应试剂盒及pGEM-T载体为美国Promega公司产品，T4DNA连接酶为华美生物工程公司产品，感受态细胞为本校基础部生物化学和分子生物学教研室惠赠，PCR扩增仪为英国JENCONS公司产品. 　　1.2 大鼠垂体前叶细胞原代培养 雄性SD大鼠，体质量200～250g，用10g#12539L-1 戊巴比妥钠（30mg#12539kg -1 ）腹腔麻醉后，20mL无菌生理盐水灌注，迅速浸入