电针对局灶性脑缺血大鼠缺血区皮层神经生长因子表达的影响_医学论文.docVIP

电针对局灶性脑缺血大鼠缺血区皮层神经生长因子表达的影响_医学论文 电针对局灶性脑缺血大鼠缺血区皮层神经生长因子表达的影响_医学论文 作者：易玮，许能贵，汪帼斌，佘世锋，徐振华，赖新生 【关键词】脑缺血／针灸疗法；,,神经生长因子／针灸效应；,,百会,穴；,,大椎,穴；,,疾病模型,动物；,,大鼠 　摘要：【目的】探讨针刺对缺血性脑损伤的保护作用。【方法】SD大鼠36只，随机分为假手术组、缺血模型组和电针组，每组又分为2周和5周两个时间段组；除假手术组外，其他组均采用热凝闭大鼠大脑中动脉法复制局灶性脑缺血模型，采用免疫组化法观察缺血2周和5周后缺血区皮层神经生长因子(NGF)的变化规律以及针刺对其影响。【结果】两个假手术组大鼠手术侧皮层只见到很少的NGF免疫阳性细胞；两个缺血组大鼠脑缺血区皮层NGF免疫活性细胞的表达与假手术组比较显著增多（Ｐ＜００１），缺血5周组与缺血2周组相比缺血区皮层NGF阳性细胞的数量下降（Ｐ＜００１）；电针组在2周时缺血区皮层NGF免疫阳性细胞的表达增高，与缺血2周组、假手术2周组相比差异具有显著性意义（Ｐ＜００１）；电针5周组大鼠脑缺血区皮层NGF免疫阳性细胞表达虽呈下降趋势，但仍高于同时间段的缺血组大鼠（Ｐ＜００１）。【结论】电针可以增加大鼠脑缺血区皮层NGF的分泌和表达时程，这可能是其保护缺血性脑损伤的机制之一。 关键词：脑缺血／针灸疗法；神经生长因子／针灸效应；百会，穴；大椎，穴；疾病模型，动物；大鼠 　神经生长因子(NGF)是由神经元自身所支配的靶组织产生的特异蛋白分子，通过神经元轴突逆行运输到神经元胞体，与特异的神经细胞受体结合，激活细胞代谢，调节细胞生长。NGF在脑内的含量虽少，但对神经细胞的发育、成熟和存活起着极为重要的作用。神经生长因子的供应数量是有限的，神经元在发育过程中，得到神经生长因子的细胞才能生存，得不到的则死亡，存在一种竞争关系［１］。而在病理情况下，NGF起着保护神经元避免损伤的作用，可以提高神经元的存活［2］。由于NGF在脑损伤时对神经细胞具有重要的保护作用和促进神经细胞功能恢复的作用，因而成为国内外学者研究的热点。不同原因的脑损伤均可引起NGF表达的增加，一般在脑缺血后2?hNGF表达就出现，表达时程依缺血时间长短和程度轻重而不同。已有研究表明［３］，急性脑缺血损伤后NGF的表达对神经细胞具有重要的保护作用和促进神经元功能恢复作用，为求证NGF是否参与脑缺血损伤后期对神经元的保护过程，本实验观察了不同时间段脑缺血大鼠缺血区皮层NGF的表达及电针对其干预作用。现报告如下。 1材料与方法 11动物 健康纯种SD大鼠36只(由广州中医药大学实验动物中心提供，合格证号：000000250)，雌雄各半，体质量180～240?g。自来水喂养，饲以普通颗粒型大鼠饲料(含蛋白?230?g/kg，脂肪47?g/kg，钠盐24?g/kg)，动物房温度控制在18℃～26℃，光暗周期各12?h。由抽签法随机分为假手术组、缺血模型组和电针组，每组又分为2周和5周两个时间段组，共6小组，每小组6只大鼠。其中缺血模型2周组在第3天时死亡1只。 12试剂与仪器 40?g/L多聚甲醛；001?mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)；体积分数为3%的Ｈ２Ｏ２；牛血清白蛋白(BSA)；二氨基联苯胺(DBA)；聚乙二醇辛基苯基醚(TritonX１００）；第一抗体为羊抗大鼠NGF抗体(Chemicon公司产品，购于深圳晶美公司)；生物素标记的第二抗体为兔抗羊IgG(Chemicon公司产品，购于深圳晶美公司)；普通光学显微镜(×４００）；３０号1寸毫针(华佗牌，苏州医疗用品厂生产)；G?6805１电针治疗仪(青岛华青仪器厂)。 13模型复制 采用热凝闭大脑中动脉法复制局灶性脑缺血(MACO)模型［４］。具体方法是用100?g/L水合氯醛溶液，按400?mg/kg剂量腹腔麻醉；取右上侧卧位固定，沿耳眼连线中点切开皮肤，分离颞肌，暴露颞骨作一骨窗，轻抬脑，显露大脑中动脉，用烧红的不锈钢丝轻触大脑中动脉，使之凝闭，复制局灶性脑缺血模型；其中假手术者只作手术暴露大鼠大脑中动脉，不予凝闭；电针组立即给予电针治疗。 14治疗方法 141穴位选择穴位选取督脉经的百会、大椎2穴，其定位参照大鼠的常用针灸穴位［５］：“百会”位于顶骨正中；“大椎”在第7颈椎与第1胸椎间，背部正中。 142刺法电针组大鼠以30号1寸毫针斜刺百会05寸(同身寸)，直刺大椎05寸，将针柄分别连接至电针仪上，5～10?Ｈz，疏密波，强度以大鼠安静耐受为度，一般3～5?V，时间30?min。每天1次，均在上午10点左右进行，分别连续治疗2周(2周组)和5周(5周组)。假手术组和缺血模型组大鼠只在同等条件下饲养，未予任何处理。 15标本