活性光合细菌制剂的强化培养研究.docVIP

活性光合细菌制剂的强化培养研究 摘 要:在光照800Lux~1100Lux、温度25e~32e的条件下进行活性光合细菌制剂的强化培养研究.结果表明,以牛肉水提取液为主要成份,并辅以无机盐、维生素B族及药效植物提取液的培养基,在3~4天就能培养出活菌数大于50亿/毫升的活性光合细菌制剂,由此证明这种培养基是一种高效、低耗、省时的活性光合细菌制剂的培养方法. 关键词:光合细菌(PSB);强化培养;营养液 光合细菌(Photosynthesis bacteria)的菌体本身 富含蛋白质(60%以上)、维生素、辅酶及多种生理活 性物质[1],用它作饲料添加剂,能促进禽畜及水生动 物的生长,增强其抗病能力.多年来光合细菌在水产 养殖中的研究应用,取得了显著的净化水质和增产效 果[2].目前光合细菌的培养,大多数采用化学试剂的 碳源、氮源、矿物元素作为营养液,由于光合细菌是一 类利用光能进行一切生理作用的水圈微生物,且总是 伴随其他的细菌一起生长,使得在培养过程中存在着 细菌繁殖速度慢、时间长、杂/死菌多等问题[3],特别 是在南方的阴雨天气和北方的春冬季节,培养时间需 要14天以上,活菌浓度低,严重制约了光合细菌的应 用市场.因此,研究培养短时间、低成本、高浓度的活 性光合细菌成为生物化学领域急待解决的难题. 1 实验部分 1.1 主要原料和仪器 新鲜牛肉,氯化钠,复合维生素B,磷酸二氢钾, 酵母粉,药效植物, pH调节剂 高温消毒锅,UV-960紫外-可见分光光度计 (澳大利亚GBC公司) 实验菌株:经鉴定为红螺菌科红假单胞菌,细菌 数30亿/ml. 1.2 培养液组成 1.2.1 Ⅰ号培养组成 牛肉水提取液100ml, 1g NaCl, 0.6g KH2PO4, 蒸馏水900ml,115e灭菌20min,维生素B族0.2g, pH=8.0. 1.2.2 Ⅱ号培养液组成 牛肉水提取液90ml, 1g NaCl, 0.6g KH2PO4, 维生素B族0.2g,蒸馏水900ml,药效植物提取液 10ml,pH=8.0. 1.2.3 Ⅲ号培养液组成 牛肉水提取液80ml,酵母粉016g, 1g NaCl, 016g KH2PO4,维生素B族011g,药效植物提取液 20ml,自来水900ml,pH=715. 98 *收稿日期:2005-02-28. 基金项目:广西民族学院重点项目1 作者简介:禤金彩(1965-),女,广西横县人,广西民族学院化学与生态工程学院实验师,主要从事生物材料的研究.1.3 培养工艺 分别在三角烧瓶、玻璃瓶和塑料壶中进行逐级光 合细菌的培养,光照强度800Lux~1100Lux,温度 25e~32e,接种量10%~20%.一级培养采用无菌 操作进行,半开放培养采用蒸馏水接种,敞开和扩大 培养采用处理过的自来水接种.光合细菌计数采用分 光光度计测定660nm处光密度值O#D,从已知菌数 的不同浓度与光密度值关系求出细菌数.流程如图1 所示. 图1 培养示意图 2 结果与讨论 2.1 培养基的选取 以往的培养基通常以化学或生物试剂为主.本实 验选用牛肉水提取液,有效地保持了牛肉中的蛋白 质、氨基酸、微量元素,提高营养液的生物学价值,有 利于光合细菌的迅速繁殖.图2是两种培养基的光合 细菌生长曲线. 图2 不同营养液的光合细菌生长曲线 u-为Ⅰ号营养液一级培养光合细菌生长曲线 s-为普通营养液光合细菌生长曲线 从图2可看到,本实验采用的营养液3天就达到 通常的培养液培养7天的光密度值,细菌数超过50 亿/ml.说明牛肉水提取液的生物有效利用率较高. 2.2 维生素B族的作用 酵母粉是良好的维生素B来源,但由于其含有 大量淀粉分子,在培养过程易发生耗氧发酵,对于大 规模培养的前期阶段会影响光合细菌活性,使后期扩 大培养死菌数增多,发生分层沉淀现象.表1是使用 维生素B和酵母的对比实验结果. 表1 对比结果 Ⅰ号营养液O#D值 (4天) 镜检结果 (杂菌、死菌) 存放两周分层 厚度(cm) 维生素B 2.364 -,- 0 酵母2.533 +,++ 5 维生素B+酵母2.391 -,+ 3 空白0.955 ++,+++ 8 从对比情况看,酵母对于促进光合细菌的繁殖速 度作用较大,但死菌较多,同时存在杂菌,而使用维生 素B可以增强光合细菌的活菌数.因此根据多级培 养的需要,Ⅰ、Ⅱ号营养液只使用维生素B,Ⅲ号营养 液使用酵母粉和维生素B. 2.3 植物水浸液对光合细菌生长的影响 实验结果表明,某些植物在一定浓度范围内可促 进光合细菌的生长,结果参见表2. 表2 植物提取液加入量对O#D660值的影响 加入量O#D值 (%) 1天2天3天4天 0 0.596 0.811 1.024 1.354 1 0.786 1.265 1.881