生活中趣味微生物的实验讲义.docVIP

实验一 泡菜的制作 （一）实验目的： 学习泡菜的制作技巧 （二）实验原理： 泡菜制作是以乳酸发酵为主，同时利用食盐的高渗透压作用，兼有蛋白质分解的微生物发酵过程的冷加工方法，对蔬菜的营养成分、色香味等的保存十分有利。 千百年来，泡菜不但以其酸鲜纯正、嫩脆芳香、清爽可口、回味悠长的特点吸引众多食客，还因其开胃口、促消化、解荤腥、增强食欲的功效为世人所乐意接受。选料? （五）注意事项： 泡菜的制作看上去很简单，但要泡出色香味俱佳、营养卫生的泡菜，应该掌握原料性质，注意选择容器、制备盐水、搭配调料、装坛等技术。如调料是泡菜风味形成的关键，泡菜坛的选择亦关乎泡菜的制作成败。 实验三 泡菜中乳酸菌的分离及形态观察 （一）实验目的： 熟悉从包菜中分离有关乳酸菌的方法 （二）实验原理： 乳酸菌都是一些兼性厌氧菌或耐氧厌氧菌，杆状或者球状，无芽孢，不运动，分解和合成能力较差，营养要求较高，在琼脂培养基表面或内层只行成较小的白色或淡色菌落，但在麦芽汁碳酸钙琼脂培养基表面，菌落周围可出现透明圈。 （三）实验器材： 1、材料：泡菜汁、麦芽汁碳酸钙琼脂培养基 2、器皿：培养皿，接种环，烧杯等。 （四）操作步骤： （1）浇注平板：每组浇注4块平板。 (2)平板分离：将泡菜汁通过直接平板划线法分离出单菌落。。 (3)恒温培养：置37度培养48小时以上。 （4）观察菌落：在麦芽汁碳酸钙琼脂培养基表面，菌落周围可出现透明圈。 实验四 光学显微镜的使用 一、细菌观察---简单染色 （一）实验目的： 了解显微镜的构造、使用原理及使用过程中的注意事项。 （二）实验原理： 细菌的细胞小而透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须对它们进行染色，使染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而能清楚的观察到其形态和构造。 用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。 简单染色法是用一种染料使细菌着色以显示其形态，简单染色不能辨别细菌细胞的构造。 （三）实验器材 1、活材料：泡菜中分离的乳酸菌 2、染色液和试剂：95%酒精、复红、二甲苯、香柏油 3、器材：废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、烧杯（300mL）、滴管、玻片搁架、接种环、擦镜纸、镊子、显微镜等。 （四）实验方法： 简单染色： （1）涂片：取干净载玻片一块，在载玻片中间加一滴蒸馏水，按无菌操作法取菌涂片，做成浓菌液。亦可直接在载玻片上制薄的涂面，注意取菌不要太多。 （2）晾干：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文火烘干。 （3）固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜） （4）染色：将固定过的涂片放在废液缸上的搁架上，加复红染色1-2min。 （5）水洗：用水洗去涂片上的染色液 （6）干燥：将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。 （7）镜检：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。 二、显微镜的构造及使用 普通光学显微镜是一种精密的光学仪器。以往最简单的显微镜仅由几块透镜组成，而当前使用的显微镜由一套透镜组成。普通光学显微镜通常能将物体放大1500—2000倍。 （一）显微镜的构造 普通光学显微镜的构造可分为两大部分：一为机械装置，一为光学系统，这两部分很好的配合，才能发挥显微镜的作用。 1、显微镜的机械装置 显微镜的机械装置包括镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗动螺旋、微动螺旋等部件（1）镜座 ?镜座是显微镜的基本支架，它由底座和镜臂两部分组成。在它上面连接有载物台和镜筒，它是用来安装光学放大系统部件的基础。（2）镜筒 ?镜筒上接接目镜，下接转换器，形成接目镜与接物镜（装在转换器下）间的暗室。（3）物镜转换器 ?物镜转换器上可安装3—4个接物镜，一般是三个接物镜（低倍、高倍、油镜）。Nikon显微镜装有四个物镜。转动转换器，可以按需要将其中的任何一个接物镜和镜筒接通，与镜筒上面的接目镜构成一个放大系统。（4）载物台? 载物台中央有一孔，为光线通路。在台上装有弹簧标本夹和推动器，其作用为固定或移动标本的位置，使得镜检对象恰好位于视野中心。（5）推动器? 是移动标本的机械装置，它是由一横一纵两个推进齿轴的金属架构成的，好的显微镜在纵横架杆上刻有刻度标尺，构成很精密的平面座标系。