第五章植物的胚胎培养及离体.pptVIP

31 第五章 植物的胚胎培养及离体授粉;Hanning (1904) 最早在无菌条件下进行十字花科辣根菜、萝卜成熟胚培养获得成功。 Laibach (1925，1929)用宿根亚麻×奥地利亚麻（Linum perenne × L.austriacum）胚培养，得到了杂种植物。因为在远缘杂交的组合中，植物所结的种子发育不良，不能萌发。可将胚置于人工培养基上培养成功。 在高等植物种间或属间远缘杂交时的问题: ①由于不亲和性，常常还会发生花粉不能在异种植物柱头上萌发或花粉管生长受到抑制不能进入子房的受精前障碍。 ②或即使受精，由于胚乳发育不良或因胚与胚乳间不亲和而使胚在早期败育。胚胎培养可以在胚乳发育不良时，把胚在早期及时取出培养，有可能获得杂交的成功。;第一节 植物胚胎培养的类型和应用; 幼胚指尚未成熟（发育早期）的胚。在离体培养时比成熟胚培养困难，要求的技术和条件较高。 幼胚离体培养有两种不同的生长方式： 1)继续进行正常的胚胎发育，维持胚性生长。 2)迅速萌发为幼苗，不维持胚性生长，这种情况称为“早熟萌发”（precocious germination）。早熟萌发形成的幼苗往往畸形瘦弱，甚至引起死亡。;二 、培养方法;2、幼胚的分离及培养;Monnier(1976,1978)介绍了一种培养方法;胚乳看护培养 Ziebur等 (1951)报道，在进行大麦未成熟胚离体培养 时，培养基上存在来自同一物种另一种子的离体胚乳，对胚 的生长有明显的促进作用。 谷类胚胎嫁接的研究发现，当大麦胚移植到小麦的胚乳上 时，比在大麦胚乳上生长更好。 Kruse(1974)在某些属间杂交中，若把杂交未成熟的胚放 在事先培养的大麦胚乳上培养，能显著提高获得杂种植株的 频率。 大麦（Hordeum vulgare）×黑麦(Secale cereale)属间杂交，采用这种方法有30%～40%的杂种未成熟胚可以发育成苗，而用传统的胚培养法只有1%能成功。;De lautour等（1980）改良胚乳看护培养（图4-2）。他们把杂种离体幼胚嵌入到由双亲之一胚乳中，然后把二者一起放在人工培养基上培养。;三、胚胎培养的应用;四、影响胚培养的因素;2．碳水化合物糖在胚培养中具有三个方面的作用：①调节培养基的渗透压、②作为碳源和能源、③防止幼胚的早熟萌发。;3．其它成分 氨基酸：谷氨酰胺、水解酪蛋白被广泛。 维生素类：有硫胺素、吡哆醇、烟酸、泛酸钙等。维生素对发育初期的幼胚的培养来说是必须的。 外源激素：成熟胚生长一般不需要即可萌发，而加入一定量的激素可显著增加培养物的生长、并利于休眠种胚的萌发。 外源生长物质和植物内源激素之间某种平衡，是维持幼胚胚性生长的关键。如果激素浓度低，则不能促进其生长；如果激素浓度过高，将会使幼胚发生脱分化而影响其正常发育。 天然提取物：如椰乳、大麦胚乳、麦芽、马铃薯块、大豆等提取物，对胚生长有促进作用。 Van Overbeek等使用椰子汁培养曼陀罗的心形胚获得成功。 王伏雄（1963）发现蜂王浆对银杏幼胚正常分化有促进作用、胚 的死亡率减少、抑制胚形成愈伤组织。;（二）、环境条件 1．温度 对大多数植物胚的培养来说，温度保持在25～30℃较为合适。 而在20℃下马铃薯胚培养较好。在25～30℃范围内柑橘、苹果、梨合适。 32℃时棉花胚生长最好。桃则需要变温条件下进行。 2．光照 光对胚胎发育有抑制作用，一般黑暗或弱光下利于幼 胚的培养。 （三）、 胚柄对幼胚培养的影响 研究表明，胚柄参与幼胚的发育过程。当胚发育到球形期时， 胚柄也发育到最大。 红花菜豆中，较老的胚，不管有无胚柄的存在，均能在培养基 中生长；但幼胚培养，不带胚柄会显著降低形成小植株的频率。;胚乳培养(endosperm culture)是指将胚乳组织从母体上分离出来，通过离体培养，使其发育成完整植株的过程。 裸子植物中胚乳是由雌配子体发育而成的，是单倍体。 被子植物中胚乳一般是双受精的产物，是由两个极核和一个雄配子融合而成的三倍体。 而待宵草型胚囊只有一个极核与精细胞融合，胚乳为2n。;;一、 培养方法; （三） 三倍体后代的特征 1．形态特征： 粗壮，叶片大而肥厚，叶色浓，花型大或重瓣，果实大但结实率低。 2．胚乳再生植株的倍性 在胚乳培养中常常发生染色体倍性的混乱现象。即多数胚乳培养具有多种数目的染色体细胞组成。 黄贞光等（1982）报道，来源于猕猴桃同一植株的胚乳，可以培养出三倍体和二倍体两种倍性的植株。 影响胚乳细胞在培养中染色体稳定性的因素主要有： 胚乳的类型、胚乳愈伤组织发生的部位以及培养基中外源激素的种