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第十章 组织培养快速繁殖技术 植物界三大生殖方式及其特点 组织培养快速繁殖技术的必要性和优越性 组织培养快速繁殖技术的建立 植物界三大生殖方式及其特点 有性生殖、无性生殖、无融合生殖 一、有性生殖 概念：通过雌雄性的生殖细胞的结合产生种子和果实，再由种子发芽形成新的个体的生殖方式， 特点：可以结合父母本的优良性状，如:杂种优势等，但同时造成了后代遗传性状不一致(基因型不一致，发生分离) 有性生殖 假设雌株的基因型为AB,其经过减数分裂产生的配子为A和B 雄株基因型为ab,其经过减数分裂产生的配子为a和b 其后代基因型为: 有性生殖 雌雄同株或同花时,假设植株的基因型为AB, 产生的配子(生殖细胞)为A和B两种, 其后代的基因型为: 二、无性生殖 概念：不通过生殖细胞，而直接用营养体繁殖的方式，又叫营养繁殖. 特点：后代遗传形状完全相同，产生的一个后代群称为无性系，无性系群体中的个体表现出一致的性状，具有作为商品的一致性. 无性生殖 常规的无性繁殖：分株、扦插、嫁接、或利用鳞茎、球茎、块茎、块根等进行繁殖 组织培养快速繁殖（微体繁殖）：也是无性繁殖，优点：有较短的时间和较少的空间，由一个个体产生大量的植株 三、无融合生殖 指发生在植物的生殖器官中，不经过精卵融合，而以种子进行繁殖的生殖方式. 如：孤雌生殖或孤雄生殖 发生在少数物种中，发生频率极低 组织培养快速繁殖技术的必要性和优越性 大多数果树和观赏植物都是高度杂和的，它们的后代会发生分离而性状不一致。 要得到遗传一致的个体，就必须采用无性繁殖的方法. 优越性：可以在短时间内获得大量的遗传一致的个体. 组织培养快速繁殖技术的建立 一、试管苗的初代培养 （一）无菌培养物的建立 1.外植体的选择 2.培养基的配制（选择）和灭菌 3.外植体的选择和消毒 4.接种 无菌培养物的建立 注意事项：污染 经验：一般的污染，在接种后2-3天就可以出现. 原则：由于外植体和培养环境所残留的微生物中，有的细菌和真菌生长很缓慢，需要一定的时间和条件才能出现污染，一般20天后没有污染才能确定没有污染. 细菌污染 现象：外植体周围形成细菌膜，逐渐产生粘液或浑浊的水迹，并进一步在培养基与外植体接触处产生气泡，时间长了会出现乳白色或橙黄色的菌落，成圆形并很快扩大. 原因：在某一个环节消毒不彻底，如：外植物消毒不彻底、无菌水消毒不彻底；或操作人员违反操作规程，在接种的同时，说话、咳嗽等都能引起污染. 真菌污染 现象：在培养基中真菌孢子存在的地方产生白色菌丝，可以在外植体和培养基中看到，在夏天阴雨天、空气湿度的时，甚至在棉塞表面都可以看到. 预防：定期对接种室和培养室进行消毒；定期检查超净工作台的滤膜是否因老化而失效；对已经污染的培养瓶，进行彻底灭菌后再清洗； 培养基污染 现象：在尚未接种的培养基的表面和中间产生细菌菌落，进一步产生气泡.特点是几乎同一锅灭菌的培养基都发生污染. 对策：检查高压灭菌锅各主要部件如：压力表、放气阀等是否出现问题；操作过程中放气和控温是否规范；培养瓶的封口膜是否封好 常见培养基污染的原因： 灭菌锅内的冷空气未排净，从压力表看到的预定温度和压力，而灭菌锅内实际温度并达到压力表显示的指标，从而达不到彻底灭菌的效果. 培养基的褐变 现象:外植体在培养过程当中,由伤口表面出现褐色物质,颜色由浅变深,严重时可将材料周边的培养基染成褐色,影响外植体的启动、分化和生长. 原因：外植体由自养变成异养，细胞代谢发生变化，产生了一些植物碱，主要是酚类化合物，被多酚氧化酶氧化成醌类物质，醌类物质呈棕褐色，扩散到培养基中，使培养基变成褐色，并影响外植体的生长，严重时会导致外植体死亡. 引起褐变的因素： 植物的类型 外植体的老嫩程度 年幼的材料含酚类物质较少，而年老的材料含酚类物质较多，褐变比幼小的材料严重。 取材的季节 春冬取材褐变较轻，夏秋季取材褐变较严重。 培养基中无机盐和肌醇浓度 光照过强和高温也会加剧褐变 克服方法 1.选择合适的外植体 2.改变外植体的培养条件 3.加入抗氧化剂 4.加入活性碳 5.及时更换新的培养基 克服方法 1、选择合适的外植体 标准：根据影响褐变的因素来选择 选取幼年的材料，对取材的时期、季节、时间都要进行实验； 根据实验结果及前人的经验选择最合适的时期和部位进行接种. 注意：切取外植体时尽量减少伤口的面积 克服方法 2.改变外植体的培养条件 光照、温度、湿度等 3.加入抗氧化剂(是防止褐变的有效措施) 原理:能与多酚氧化酶竞争性结合,从而减少其与外植体产生的酚类化合物的接触机会,有效的防止褐变. 常用的抗氧化剂: 抗坏血酸、柠檬酸、半胱氨酸等 克服方法 4.加入活性碳 是一种吸附剂，在培养基中加