第七章 蛋白质修饰和降解.pptVIP

第七章 蛋白质修饰和降解 重点： 7.折叠与疾病 8.磷酸化、乙酰化、泛素化 9.信号肽，核转位信号 第一节 折叠 一、正确的蛋白质构象是活性的基本保证 二、分子伴侣 热休克蛋白 存在于胞浆和多种细胞器中 多种蛋白形成的家族 需要ATP供能 结合新生蛋白并保持其延伸状态 防止错误折叠 辅助Ubiquitin途径的蛋白降解 伴侣素 多亚基的桶状蛋白 非严谨的蛋白包装特异性 提供一个封闭的微环境，有利于在稳定环境下蛋白折叠 大分子的自我组装依然是主要正确组装基础 多结构域蛋白需要多次重复进行 分子伴侣的作用是防止和消除错误折叠 三、折叠酶 二硫键异构酶 具有内质网滞留信号，分布于内质网中 需谷胱甘肽作为底物，催化巯基形成和分解 特异性基础不明 脯氨酸异构酶 维持含有脯氨酸的肽链的正确构象 四、膜蛋白折叠机理复杂 五、折叠错误与疾病 朊病毒（PRION） 库鲁病、疯牛病是代表性的疾病 具有传染性 病原是错误折叠蛋白质 PrPC/ PrPSC 无遗传背景 Beta-折叠结构 老年痴呆症 淀粉样beta蛋白、tau蛋白 第二节 寡聚化 3D结构域交换模型 结构域对换 亚基间有共同的3D结构域 朊病毒的蛋白高度聚集与该机制有关 第三节 共价修饰 一、切除Met 二、蛋白酶前体的酶切激活 信号肽 蛋白酶原的激活 三、磷酸化和去磷酸化 Ser、Thr or Tyr残基 蛋白激酶和磷酸化酶 转录因子、信号分子 四、糖蛋白修饰 N-糖基化 Asn残基侧连N原子 内质网发生 Asn-X-Ser/Thr是N-糖基化信号，自动进行 O-糖基化 Ser、Thr侧连O原子 高尔基体进行 N-乙酰半乳糖胺转移酶催化 非常重要 1/3真核蛋白被糖基化 涉及折叠、聚合和降解，糖蛋白分拣和投送 五、脂酰化修饰定位蛋白于膜 N端豆蔻酰化 棕榈酰化 六、乙酰化和去乙酰化平衡 乙酰基转移酶-转移CoA到蛋白质 乙酰化使组蛋白解离染色质 HATs/HDACs 七、二硫键 八、金属离子结合 第四节 蛋白质的靶向运输 一、信号肽（SIGNAL PEPTIDE） 信号肽是内质网靶向信号 在内质网被酶切（信号肽酶） 信号肽与其它相关蛋白的功能在于将新生的肽链锚定于内质网 膜蛋白同样具有信号肽，但更多出一个停止转运信号（SIGNAL-ANCHOR SEQUENCE） 二、胞浆-细胞器蛋白运输 胞浆-线粒体蛋白运输 结构复杂，外膜、内膜、间隙和基质4区 基质导入由导肽（Leader peptide）简单导入 间隙蛋白（Cyto C）具有导肽+间隙导入序列（intermembrane-space-targeting sequence），导肽在基质被酶切 外膜导入由导肽+外膜定位序列（out-membrane location sequence）定位 内膜导入由导肽+疏水信号序列（Hydrophobic signal sequence）定位 核定位信号与核蛋白运输 复杂的核孔构造 核蛋白具有核定位序列（4-8AA形成） 核定位信号无位置特异性 定位序列与核输入受体（nuclear import receptor）结合被送入核内 核输入受体回到胞浆需要Ran-GTP运输 胞浆中的GTP酶将GTP水解为GDP，Ran-GDP回到核内 过氧化物酶体内的蛋白酶的运输类似于核蛋白 第五节 泛素-蛋白酶体途径降解蛋白质 一、蛋白质本身序列与稳定性关系密切 蛋白质在体内的周转速度不同 N-末端氨基酸序列是一个重要的稳定性因素 Cyclin的降解序列信号位于序列中间 但以上差异不能解释蛋白质的主动降解机制，一般认为与泛素系统有关 一、泛素-蛋白酶体途径 泛素化相当于给需要降解的蛋白贴标签 泛素多肽由76个氨基酸组成 ，进化上保守 “贴标签”过程涉及3种酶 泛素活化酶（Ub-activating enzyme，E1），需ATP，无底物特异性，只有几种 泛素偶连酶（ Ub-conjugating enzyme，E2），大于40种，实际催化Ub-protin ligation 泛素-蛋白连接酶（Ub-protin ligase，E3），已发现500种以上，被认为能够识别和引导Ub-E2结合到需要降解的蛋白质上，高度靶底物特异性是特异性降解的分子基础 泛素化肽链的下游事件 单一分子泛素化途径：被一个泛素分子泛素化后即可进入下游反应；多聚泛素化途径：三个以上泛素分子链接以后再反应 由于蛋白质结合泛素后，发生构象改变，而被蛋白酶小体识别，而被分解。本反应也是耗能的 蛋白酶体是一个桶状结构，通常一个人体细胞中含有3万个蛋白酶体 26S Proteasome：19S+20s，分子量巨大 经过蛋白酶体的处理，蛋白质就被切成由7至9个氨基酸组成的短链从而被分解 内质网蛋白的质量控制 通过分子