扑尔敏对映体的毛细管电泳方波安培分离检测.docVIP

扑尔敏对映体的毛细管电泳-方波安培分离检测 周建芳 刘林 陈琳 陈鑫 许迪明 陈国桢 刘嘉 （中山大学化学与化学工程学院，99级，广州510275） 指导教师：谢天尧 摘要： 本文报道了以未涂层融硅石英毛细管（50cm×75μm）为分离柱，5mmol/LNaOH + 10mmol/L Citric acid +3mmol/LH3BO3+10mmol/L?-CD (pH=3.5) 为电泳介质，分离电压12KV，检测电压0.80V，建立了朴尔敏对映体拆分的高效毛细管电泳-方波安培检测方法。对缓冲溶液的种类、浓度、pH、分离电压对拆分效果的影响进行了讨论，并对拆分机理进行了探讨。 关键词：对映体拆分，毛细管电泳，方波安培检测，扑尔敏。 手性药物在药物领域中的作用越来越被人们重视。对映异构体中，一种异构体是药物的有效组分，而另一种则可能低效，无效乃至有毒，所以美国食品与药物管理局出台了手性药物的管理法规，并引起国际上对手性药物分离分析的重视（1）。手性化合物分离检测的常用方法有高效液相色谱（HPLC）（2），气相色谱（GC）（3），超临界流体（SFC）（4）和毛细管电泳（CE）。近年来，毛细管电泳手性分离技术引起了人们的普遍重视，并得到了快速发展（5）。 目前，毛细管电泳手性药物的分离检测的文献报道中以光学检测为多，电化学检测的应用很少。毛细管电泳—电化学检测，尤其是安培检测，可使用极细孔径的毛细管而不会造成灵敏度的损失，具有检测限低、线性范围宽、选择性好、设备简单价廉，而被认为是CE的极具潜力的检测方法。近年来随着制约其应用的关键技术的突破，其应用潜能正在得到发挥，与其它类型的检测器相比，具有自身的特点和优势，日已发展成为一种重要的分离分析方法，将在手性药物拆分方面有较大的应用前景。 扑尔敏，又名马来酸氯苯那敏，氯屈末通，马来酸氯苯吡啶（6）；为优良的抗组胺药物，能阻断平滑肌，内皮细胞，神经等处组织上的组胺起竞争性的抗拮作用降低机体对组胺反应，结构式见图1。扑尔敏是手性分子，含R和S型。本文首次采用高效毛细管电泳—方波安培检测法（7），以5mmol/LNaOH+10mmol/L Citric acid +2mmol/LH3BO3+10mmol/L?-CD (pH=3.5) 为电泳介质，实现了朴尔敏对映体的分离检测，取得了满意的结果。 图1 扑尔敏的结构 Fig.1 Structure of chlorpheniramine 1 实验部分 主要仪器和试剂 CES2000毛细管电泳仪（高压电源，安培检测器，毛细管电泳数据工作站，中山大学化学与化工学院研制）；PHS-3C型酸度计（上海伟业仪器厂）；石英毛细管（50cm×75μm i.d.,河北永年光导纤维厂）。CQ-2B型超声波清洗器（明珠电器有限公司）。 扑尔敏对映体（Sigma 公司产品）；?-CD（中国医药集团上海化学试剂公司产品）；氢氧化钠（广州化学试剂厂）；柠檬酸（Citric acid, 广州化学试剂厂）；硼酸（H3BO3，北京朝阳区金盏化工厂）；所用试剂均为分析纯，水为二次石英重蒸水。 1.2 缓冲液和样品溶液 分别配制以下浓度的储备液：100 mmol/L 柠檬酸、硼酸和氢氧化钠；25 mmol/L ?-CD。实验时，按比例各取适量以制得不同浓度和不同pH的电泳运行缓冲液。朴尔敏对映体配成1mg/mL 的储备液，进样时用缓冲溶液稀释到所需浓度。 1.3 实验方法 连接好毛细管电泳仪和检测装置，毛细管柱在使用前依次用0.1mol/LNaOH ，蒸馏水和运行液各冲洗约5min。检测电极用超声波进行冲洗。更换运行液或每进样4次后也需按上述步骤清洗毛细管和电极。采用重力进样，高度差为20cm，时间为15s，方波安培检测器的输出信号经数据工作站采集到微机中进行实时数据处理、图形显示和数据文件存储。实验在恒温（25 ? C），恒湿（70%）的实验条件下进行。 2 结果与讨论 2.1 ?-CD浓度的影响 手性试剂的浓度是影响分离的一个重要因素。手性试剂浓度太低，对映体的分离效果差；手性试剂浓度过高，影响缓冲液的电渗流，溶液中各组分的电泳淌 图2. β-CD浓度的影响 Fig.2 the effect of the β-CD concentration on separation a: 5mmol/L; b: 10mmol/L; c: 15mmol/L 电泳条件(conditions): 缓冲溶液(buffer): 5mmol/LNaOH+10mmol/L Citric acid +2mmol/LH3BO3+10mmol/Lβ-CD；