实验五碱性蛋白酶活力的测定.pptVIP

实验六 胰蛋白酶活力的测定 (先打开水浴锅,温度设置成40摄氏度) 一、实验目的 二、实验原理 三、实验用品 四、实验步骤 五、实验内容 六、实验报告 一、实验目的 掌握蛋白酶活力测定的原理与基本方法。 了解紫外分光光度计的原理和使用方法,学习绘制标准曲线的方法 二、实验原理 1．蛋白酶是一种水解酶，它将酪蛋白水解成酪氨酸等物质。 2．用紫外分光光度计可以定量的比较颜色的深浅，从而推导出酪氨酸的量，根据生成物的含量可以计算蛋白酶的活力。 3.蛋白酶活力单位定义：在40?C，pH11的条件下，每ml水解液分解产生的酪氨酸的量。 三、器材仪器和主要试剂 紫外分光光度计 0.5% 酪蛋白 100 μ g/mL Tyr 溶液  四、实验操作 1、酪氨酸标准曲线的制作 2、蛋白酶活力的测定 酶活力单位定义： 规定在 40 ℃ ， pH11 的条件下，水解酪蛋白每分钟1 ml水解液产生酪氨酸的量： K × （ A 样 — A 对 ）× N /（t ×V） 1. K ：标准曲线上光吸收为 1 时的酪氨酸微克数； A 样 ：样品液光吸收值； 2. A 对 ：对照液光吸收值； 3. N ：本次实验酶液的稀释倍数，5 4. t ：酶促反应的时间（分），本实验 t =10 ； 5. V ：酶促反应管的总体积（毫升数），本实验 V =5 ； 五、思考题 酶的试