高效液相色谱法(简单的).pptVIP

第四章高效液相色谱法 一、高效液相色谱法 的特点 二、流程及主要部件 三、流动相的选择 四、高效液相色谱法 的应用 液相色谱是以液体为流动相的色谱分析方法。英文缩写：LC。 按其固定相的不同，又可分为液固色谱（LSC）和液液色谱（LLC） 气相色谱只适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合物，而HPLC则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质，如挥发性差、极性强、具有生物活性、热稳定性差的物质。 现在，HPLC的应用范围已经远远超过气相色谱，位居色谱法之首。在所有色谱技术中，液相色谱法是最早（1903年）发明的，但其初期发展较慢，在液相色谱普及之前，纸色谱法、气相色谱法和薄层色谱法是色谱分析法的主流。到了20世纪60年代后期，将已经发展得比较成熟的气相色谱的理论与技术应用到液相色谱上来，使液相色谱得到了迅速的发展。特别是填料制备技术、检测技术和高压输液泵性能的不断改进，使液相色谱分析实现了高效化和高速化。具有这些优良性能的液相色谱仪于1969年商品化。从此，这种分离效率高、分析速度快的液相色谱就被称为高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC），也称高压液相色谱法或高速液相色谱法。　　 液相色谱的分类 广义地讲，固定相为平面状的纸色谱法和薄层色谱法也是以液体为流动相，也应归于液相色谱法。不过通常所说的液相色谱法仅指所用固定相为柱型的柱液相色谱法。 　　通常将液相色谱法按分离机理分成吸附色谱法、分配色谱法、离子色谱法和凝胶色谱法四大类。 液相色谱仪（1） 液相色谱仪（2） 液相色谱仪（3） 液相色谱仪（4） 一、高效液相色谱法的特点 二、流程及主要部件 2.主要部件 选择流动相时应注意的几个问题 * 液相色谱简介 液相色谱的发展 ? 蛋白、酶、抗体分离，生物和医药分析 生化特异亲和力 亲和色谱 手性异构体分离，药物纯化 立体效应 手性色谱 蛋白质分离与纯化 疏水分配作用 疏水作用色谱 离子性物质分析 疏水分配作用 离子对色谱 有机酸、氨基酸、醇、醛分析 Donnan膜平衡 离子排斥色谱 无机离子、有机离子分析 库仑力 离子交换色谱 高分子分离，分子量及其分布的测定 溶质分子大小 凝胶色谱 各种有机化合物的分离、分析与制备 疏水分配作用 分配色谱 异构体分离、族分离，制备 吸附能，氢键 吸附色谱 主要分析对象或应用领域 主要分离机理 类 型 表5－1 液相色谱分类 返回 特点：高压、高效、高速 高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。 1.流程 (1) 高压输液泵 主要部件之一，压力：15～35×106 Pa。 为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。 应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性 （1）尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 （2）避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。如使固定液溶解流失；酸性溶剂破坏氧化铝固定相等。 （3）试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。 （4）流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。 返回 * *