小鼠卵母细胞的电激活论文.docVIP

目录 摘要： 2 Abstract: 3 前言 4 1.孤雌激活的研究概况 4 2．卵母细胞孤雌激活的分子机理 5 3．卵母细胞孤雌激活的方法 5 3．1 卵母细胞的电激活 6 3．2 卵母细胞的乙醇和氯化锶激活 6 3．3 卵母细胞的蛋白质合成抑制剂的激活 6 3．4 卵母细胞的钙离子载体A23187和离子酶素(Ionomycin) 7 3．5 卵母细胞的精子因子(SF或SOAF) 7 3．6其它 7 4．卵母细胞孤雌激活的研究意义发展前景及存在的问题 7 正文 8 1.材料与方法： 8 1.1材料 8 1.1.1实验动物 8 1.1.2实验试剂 8 1.1.3实验仪器 8 1.1.4手术器械 9 1.2 方法 9 1.2.1实验试剂的制备 9 1.2.2小鼠卵母细胞的获取 9 1.2.3电激活处理小鼠卵母细胞 10 1.3活化鉴定及记录 10 1.4统计学分析 10 2.结果: 10 2.1不同场强对小鼠卵母细胞电激活效果的影响 10 2.2不同脉冲宽度对小鼠卵母细胞电激活效果的影响 11 2.3不同脉冲次数对小鼠卵母细胞电激活效果的影响 11 3.讨论 12 4.结论： 13 参考文献 13 致谢 14 摘要 孤雌激活也叫孤雌生殖，孤雌激活最早始于20世纪30年代对兔卵的研究，对小鼠卵母细胞孤雌激活的研究大概在20世纪40-50年代。半个多世纪来，关于小鼠卵母细胞电激活的报道已经很多，但，目前在国内还未见有关于使用ET-3,GOKU，（日本富士平公司）激活卵母细胞的报道。本实验以昆明系小白鼠（大连医科大学试验动物中心提供）为研究动物,采用日本富士平公司的ET-3电激活仪对小鼠卵母细胞进行人工孤雌激活,并从场强、电脉冲宽度、脉冲次数三个方面来探讨其电激活率、发育阶段的影响情况。结果表明：在场强为183V/mm、脉冲宽度10μs、2次脉冲（脉冲间隔为50ms）刺激下其激活率和2-4细胞发育率较高。 关键字：卵母细胞；电激活；小鼠； Abstract: Keywords: Ovocyte;Electrical activation;Mouse; 前言 1.孤雌激活的研究概况 孤雌激活(parthenogenetic Activition)也叫孤雌生殖(parthenogenesis), 最早由owen提出，是指有性生殖动物的卵母细胞在精子以外的刺激下,由第二次减数分裂中期（second meiometaphase MII期）继续发育,排出第二极体(PBⅡ)从而产生二倍体染色体胚胎的过程。即在没有雄性参与，由单个卵细胞产生个体的繁殖[1]，后又重新定义为无雄性配子的任何作用，由雌性配子产生的胚胎，不论其是否发生成个体，称为孤雌生殖[2].这一现象在无脊椎动物和低等脊椎动物中较为常见。自然条件下，卵母细胞激活是由精子穿入刺激引起的。在人工因素的刺激下也可使处于MII期的卵母细胞完成减数分裂,排出第二极体并发生卵裂。现在已发现有许多人工方法，如电脉冲、乙醇、磷酸肌醇脂和钙离子载体A23187等均可使小鼠、牛、仓鼠、大鼠、猪等的卵母细胞发生孤雌激活[3]。研究哺乳动物卵母细胞激活将加深人们对胚胎发生过程中的许多机理性的认识。 诱导哺乳动物孤雌发育的试验研究始于20世纪30年代，Pincus等采用改变温度和渗透压的方法激活兔卵，成功地获得卵裂，并报道移植后产生了家兔后代，但这一结果至今未能被重复。20世纪40年代和50年代，以Thibault，Chang和Auotin为代表，采用温度、渗透压和麻醉剂激活小鼠、大鼠、仓鼠、家兔、雪貂和绵羊卵母细胞，进行孤雌发育研究。20世纪60年代该领域的研究经历了一个低潮时期。20世纪70年代重新崛起，大多研究者着眼于提高孤雌激活率和发育率的方法学研究。采用电刺激或酶激活方法刺激小鼠卵，获得较高的激活率和卵裂率[4]。20世纪80年代以来研究不断深入，尤其是进入90年代，随着哺乳动物细胞核移植研究的开展，卵母细胞的孤雌激活得以较为系统的研究，在实验动物、家畜及人卵母细胞激活方面均有较大进展的，特别是1997年克隆羊“多莉”的产生，体细胞核移植获得成功，作为核移植关键步骤的受体卵母细胞激活引起了更多研究者的重视，使该领域的研究进入了新的阶段[5]。目前，在人工诱导雌核发育的鱼中，获得了能够正常受精的雌性个体，并成功地得到了人工雌核发育的第二代和第三代[6]。相比之下，哺乳动物孤雌生殖的研究还处于摸索阶段，尚未取得突破性进展。我国对脊椎动物人工单性繁殖的研究报告始见于1935年，朱洗等由蛙子宫取出蛙卵，使其卵粘膜有蛙血后用细针刺激，结果其中有十分之一左右的卵像受精卵一样进行正常卵裂，并获得两只单性繁殖蛙。目前，我国在人工诱导雌核发育的鱼中也取得了较大进展，人工诱导鲤鱼核发育和建立纯