五指山猪胚胎生殖细胞嵌合体研究.pdfVIP

率毽毒牧等医攀会韵锈繁殖学分会第十罴矮学术璐讨会论文寨 IJLIIWI IHIIIII)1 ．．．．． ．．．i ii ．．．．．．ii, I!!,ll IIVmlll !!!,,, ／燃皇 五指山猪胚胎生殖细胞嵌合体研究 牟玉蓬刘立新董晓张莉况玲陈红平刘岚潘登科冯书堂’ (孛毽农塑鞭学陵墓乏家蠹牧罄医磅究缀基因与缁脆王程室，就索100094) 摘要：嵌合体研究是胚胎多能干细胞最重要、最荚键的鉴定手段，为最终证实体外培养获得的五 援山猪(WZSP)强胎生殖细胞(EG)楚否英有多功能性，在进行一般形态学、核蘩分析、AKP染色、 OCT-4标记等鉴定的基础上，开展了WZSPEG细胞嵌合体研究。EG细胞通过藏微注射到囊胚药方法 获得了两头嵌合体猪，并应用微卫星技术检测?供傣EG缎胞雀嵌合体猪各种组织孛钧嵌合跨凌。结 暴表嘤，皮肤、太脑、胰、甲状蒜、血秀嵌合杂合体；簿、肝、蹿、肾、空脑、辩巢这整纽织并没 有嵌合，为纯合予。 关键词；玉箍蠢猪；微蔓燕；羟黪予细胞；嵌合德 嵌合体技术怒胍胎多能干细胞最关键的鉴定措施和技术手段。其对研究哺乳动物早期胚胎的发 育潜麓，探索细胞分纯规律，掌握基因的表达调控规律，建立遗传痰病动物模型等具有重要意义。 通过囊瓤鼹微注射躯黪于缁臆等方法副终哺巍动躲嵌合体、实现基澄转移琶成为生产转纂霞动物懿 重要方法之一。五指山小型猪(、ⅣZSp)近交系是实现基因改造、比较医学动物模型和昴种器官移 cells，EG) 植静理想供体嘲。因此，以WZSP近交系为对象，嚣震猪胚胎生殖缨艟(Embryonic germ 建系和嵌合体研究，其有熏要的理论价值和实践意义。 嵌合体酶分搴斤楚嵌合体涮侔中关键步骤之一【2】。近年米，分子水平的标记开始应用予嵌合体的 stem cells，ES)嵌台飘翻。Shim等 鉴定。箕中DNA指纹技术蠢建予检溅骚精于缀胞(Embryonic 用微卫星进行了嵌合体猪的鉴定【4l。本文通过微卫星分析，微卫星SW2的103bp在注射的EG细胞 系帮嵌合体猪的各种缀织中存在丽在摊供囊艇的双亲中却没鸯，进～多证实了嵌合状态，涯臻了所 培养的EG缩麓舆有多功熊性。 1 材料 l。1实验动鐾 WZSP、大自猪(公猪)、长枫自猪(母猪)、长枫黑猪、嵌合体猪及其同窝的6头白仔猪、嵌含 体猪麴9头后代{孑猪原为10头，冀巾～头被全部吃撼) 1．2主要试裁 丙烯酰胺、三氯甲烷(Chloroform)、DNA 1．3主要仪器 液器(Eppendorf)。 奉研究斑辫象皇然科学基金委97鬟丈项爨“舞辩器密移缝基础谯磷究”项臻资助(No。39993毒20)。 枣遴讯僚者；泻书豢，眩话01062815893，EmailfstS08@sina．COrn。 作者姓名：肇玉莲，焱，1976年1月生，硕士，助理研究员。 338 中豳畜牧兽联学会动物繁殖学分会第十曼届学术研讨会论文集 舅曩■—|量璺誉舅舅曼—量董, IIIII豢 2方法 2．1 猪EG缨黪的获得与培养 获WZSP近交系第7～13代培育群中，选薅融然或弱嗣发傣5～10胃羚青年母猪，予受精后筠～ 28天采集胎儿，放猩无ca2+、M92+PBS液中冲洗3次。仔细去除胎儿的内脏，分离生殖嵴，充分剪碎， 细胞加胚胎干细胞培养基，以一定的比例密度接种于制备好STO饲养层的培养胍中，放置于38C、 饱和湿度、5％C02培养籍孛壤养。隔必换液，逐天震察缨胞贴壁生长状况，一般约4天缀憨集落长 接，大约第7～9天，帮可进行传代。奉实验中，所用韵S约缁脆具有分泌L嘴生长因子功能，霹支 持和满足EG细胞生长，同有关学者的结果一致㈨驯。 2．2 嵌台钵猪静制作 2．2．1供体猪和受体猪的准静 观察长枫白猪发情周期，在其发情周翅的第16～17哭，矍琏凌