EGFP转基因小鼠的代谢组学研究.pdfVIP

B27 EGFP转基因小鼠的代谢组学研究 李洪德1，魏泓2，唐惠儒1，王玉兰” (1．中国科学院武汉物理与数学研究所波谱与原子分子国家重点实验室，武汉磁共振中心，武汉430071； 2．第三军医大学实验动物学系，重庆400038) 增强型绿色荧光蛋白(EGFP)被广泛的用作报告基因来检测目标基因在特定组织和器官 的表达。迄今为止，体外研究并没有发现EGFP有明显的毒性u’2。；大部分在体研究结果与体 外研究结果一致口3。但是，Huang等人研究表明EGFP在小鼠体内表达可以导致心肌疾病H1。 因此，关于EGFP在体表达引起的生物学效应仍然存有争议。本文运用基于NMR的代谢组学 方法结合多变量统计分析研究了慢病毒介导的EGFP转基因小鼠代谢表型的改变，并用 RT-PCR对结果进行了进一步验证。 研究结果表明(图1)，EGFP小鼠的尿样、肾脏和肝脏提取物的代谢表型与其对照组相 比，均有明显不同。EGFP转基因表达导致的代谢改变包括：肝脏中糖异生和转氨基作用的 增强；嘧啶和氨基酸的代谢异常，表现为肾脏中丙二酸含量的降低，尿样中3一脲基丙酸含 量的升高以及胍基乙酸和苯乙酸含量的降低；肾脏中延胡索酸含量的升高以及尼克酰胺、 IMP、肌苷、AMP、次黄嘌呤和鲨醇含量的降低；参与细胞膜组成的乙醇胺和起渗透调节功能 的氧化三甲胺在肾脏中含量也均降低。尿样中3一脲基丙酸的变化最显著，为了进一步探讨 导致其变化的原因，我们用RT—PCR方法，对催化3一脲基丙酸生成的B一脲基丙酸酶的基因 转录水平进行了检测。结果表明，EGFP转基因小鼠的13一脲基丙酸酶的mRNA含量明显低于 对照组．(p0．005)(图2)。由此进一步说明尿样中3一脲基丙酸的升高是由于EGFP转基因表 达下调了13一脲基丙酸酶基因的转录而导致的。本研究为EGFP在体表达的生物学效应提供了 新的理解，使用EGFP作为报告基因时，应该考虑到其可能带来的不良影响。 a e。 R2x—ots肼-o ，＼ 一＼ r” 图1EGFP转基因小鼠(T) 04W ’T 臻 导。。≥．．? jI 乏；， 与其野生型小鼠(w)比较 ‘0乞、：j。一4 00 04 -1’r ●i s和 。。’u ／ J…㈠1。、!’n一’ “”9 。。。。，孑，。。。，。…。3。23。。：。：、。，。st…loading图，相关系数frI的 6 ≯o竺烀”}4× 7 l三 临界值为0．514．(a)尿样；