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二斑叶螨几丁质酶基因的原核表达及多克隆抗体制备.pdf
网络出版时间：2015-01-12 09:54
网络出版地址：/kcms/detail/23.1391.S0954.015.html
第46卷第1期 东 北 农 业 大 学 学 报 46(1):00~00
2015年1月 JournalofNortheastAgriculturalUniversity January2015
二斑叶螨几丁质酶基因的原核表达及多克隆抗体制备
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张道伟 ，陈 静 ，张正玲 ，曾燕玲 ，郭玉双
（1. 遵义师范学院生命科学学院/ 赤水河流域动物资源保护与应用研究重点实验室，贵州 遵义 563002 ；
2. 遵义医学院生化与分子生物学教研室，贵州 遵义 563009 ；3. 贵州省烟草科学研究院，贵阳 550083 ）
摘 要：以制备的二斑叶螨cDNA为模板，克隆二斑叶螨几丁质酶SeChi基因功能结构域催化区片段，大小为
786bp。将该序列片段克隆到表达载体pET-32a(+)中，获得多克隆原核表达载体pET-32a-TuChi。重组质粒经酶
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切测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3)，经0.6mmol·L IPTG诱导4h后高效表达约45ku可溶性重组蛋白；经His
亲和层析洗脱和浓缩获得高纯度的重组蛋白免疫新西兰大白兔制备TuChi多克隆抗体。制备的多克隆抗体经
WesternBlot证实能特异性地识别几丁质酶而不与非特异性蛋白结合。ELISA分析表明制备的抗体效价达180000，
效价较高，为进一步研究二斑叶螨几丁质酶相关功能奠定基础。
关键词：二斑叶螨；几丁质酶；原核表达；多克隆抗体
中图分类号：Q786 文献标志码：A 文章编号：1005-9369（2015）01-0000-06
张道伟, 陈静, 张正玲, 等. 二斑叶螨几丁质酶基因的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 东北农业大学学报, 2015, 46(1): 00-00.
Zhang Daowei, Chen Jing, Zhang Zhengling, et al. Expression and polyclonal antibody preparation of chitinase gene in Tet-
ranychus urticae Koch[J]. Journal of Northeast Agricultural University, 2015, 46(1): 00-00. (in Chinese with English abstract)
Expressionandpolyclonalantibodypreparationofchitinasegenein
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Tetranychus urticae Koch/ZHANG Daowei , CHEN Jing , ZHANG Zhengling ,
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