农杆菌介导大豆子叶节遗传转化的研究.pdfVIP

维普资讯 第31卷 第 2期 作 物 学 报 Vo1．31．No．2 2OO5年 2月 170—176页 ACTAAGRONOMICA sINICA pP．170—176 Feb．，2005 农杆菌介导大豆子叶节遗传转化的研究 李桂兰 乔亚科 杨少辉 靳朝霞 李明刚 (河北科技师范学院，河北昌黎066600；南开大学分子生物学研究所 ，天津300071) 摘 要：直接以农杆菌转化系统为平台，以栽培大豆(Glycine L．)吉林35、中黄28、南农、铁丰29、铁丰3O和开育 12 的子叶节为外植体 ，用 LBA4404农杆菌(含pPC．KSA质粒)研究了影响大豆子叶节转化的因素。结果表明，大豆品种之间 转化存在着差异，吉林35转化率最高，平均转化率为 2．16％，单次最高转化率达 6．12％；中黄28次之，平均转化率为 1．9％。单次最高转化率达3．33％；南农转化率为1．05％；铁丰29居第4位，转化率为0．95％；铁丰30和开育 12无转化植 株。用4d苗龄的子叶节 ，农杆菌浸染30rain，共培养3d比较合适。萌发培养基和不定芽诱导培养基对转化率的影响存 在交互作用，对于吉林 35来说，大豆萌发培养基(G)和不定芽诱导培养基(Y)的最佳组配方式为G2+Y1(转化率6．12％) 和G1+Y2组合 (转化率 5．26％)。农杆菌介导的转化系统 中，转化植株的筛选方式对转化率影响很大，筛选培养初期， 采用比较低的筛选浓度 ，在继代培养过程中逐次提高筛选压力，可以获得较好的转化效果。 关t词：大豆；根癌农杆菌 ；子叶节；转化 中圈分类号 ：s565，QTS StudyoftheAgrobacwrium-mediatedTransformation donaryNode LIGui．Lan。．_ QIAOYa．Ke。，YANGShao．Hui2，JINZhao．)i【a2，LIMing-Gang~ 。 (Htbt／NtmnalUnlmrsityof＆ ＆Techno／ogy，Chang／／O6660O，／／eat,／； Inst~uteofMokodarB／o／off／，Nanka／“呐Ⅻ嘶 ，T／anjn／300071，Chn／a) AhsI嘣 ：Suitablesoybean genetictransformation system hasnotbe en establishedbynow．Thefactorsinfluencing Agraba~ru／m-mediatedsoybeancotyledonarynodetransformationweIestudiedinthisresearchSOastoimprovethetrans- formationfrequencyofsoybean．Th eresultsshowedthatthetransformationfrequencywasdifferentamongcultivarsofosy- bean．Jilin35w8shtehighestintransformationrate．Zhonghuang28Waghtesecondandfollowedby Nannong andTiefeng 29，nadtherewasnotIltI~ornledplantinTiefeng30nadKaiyu12．Theaveragenadhtehihgesttransformationratewere 2．16％nad6．12％forJilin35，and1．9％nad3．33％forZhonghuang28，respectively(Table1)．Thesuitableseedling agew88about4days-old(Fig．5)andhteappropriatedurationofinfectionnadCO—culturewithAgrobacteriumwereabout30 minutesnad3adysrespectively(Fig．4)．Therewasna intera