一株分解纤维素的肠球菌的分离鉴定.pdfVIP

2008年 3月 内蒙古大学学报 (自然科学版) Mar． 2008 第39卷第2期 JournalofInnerMongoliaUniversity Vo】．39 No．2 文章编号：1OOO一1638(2008)02—0166—06 一 株分解纤维素的肠球菌的分离鉴定 刘 占英h。，侯先志 ，刘玉承 ，刘小刚 ，杨 帆 ，赵子夫 (1．内蒙古农业大学动物科学与医学学院，呼和浩特 010018} 2．内蒙古工业大学化工学院，呼和浩特 010051) 摘要：从绵羊瘤胃内容物中分离出一株高效纤维素降解细菌．经形态学、生理生化反应和基因 型的鉴定，鉴定为肠球菌属的一个种，其 16SrDNA序列 (1480bp)在NCBI中的登录号为 EULO6O47，并将所测得的序列用ClustalW 软件按Neighbor—Joining方法构建了16SrDNA系 统发育树． 关键词：纤维素降解细菌；分离；鉴定 中图分类号：Q93—331 文献标识码 ：A 纤维素是地球上最丰富的可再生的生物质资源，它占植物干重的35 ～5O ，是地球上分布最 广、含量最丰富的碳水化合物，它的降解是 自然界碳素循环的中心环节n．纤维素的利用与转化对于 解决 目前世界能源危机、粮食短缺和环境污染等问题具有十分重要的意义．自然界中存在着一些微生 物能够把纤维素降解为可利用的多糖或单糖，从而使大量的纤维素资源能够得到利用．目前，对产纤 维素酶的微生物研究较多的是霉菌0，对产纤维素酶细菌分离筛选的较少，但因为霉菌是好氧微生 物，其培养过程中需要氧气的特性使其在环境污染等方面的应用受到了限制，所以研究厌氧或兼性厌 氧纤维素降解菌在应用上更具有现实意义．近年来，一些学者对厌氧和兼性厌氧的纤维素降解菌进行 了研究。 ，以扩大纤维素酶在环境污染等方面的应用．本研究最初 目的是为了从 以粗纤维为饲料 的绵羊瘤胃内容物中分离出厌氧纤维素降解菌，但在分离的菌株中发现一株兼性厌氧的肠球菌对纤 维素也具有较好的降解能力，现报道如下： 1 材料与方法 1．1 材料 1．1．1 培养基的配制 1)分离培养基(培养基A)：羧 甲基纤维素为唯一碳源的培养基，具体配方参见文献63，因为是 细菌培养，将文献63培养基中的青霉素和链霉素去掉。 2)富集培养基和液体发酵培养基 (培养基B)：纤维二糖作为唯一碳源，其他成分同1．1．1．1，并去 掉琼脂 ，做成液体培养基． 3)复筛培养基(培养基C)：将培养基B中的纤维二糖用3片5cm×lcm的WhatmanNO．1滤纸代 替． 4)测滤纸降解率所用培养基(培养基D)：将培养基B中的碳源纤维二糖用烘至恒重后球磨的 WhatmanN0．1滤纸代替，滤纸加量为0。5000g／100mL． · 收稿 日期：2007—11—14 基金项 目：国家 自然科学基金资助项 目 作者简介；刘占英(1979~)，女，内蒙古赤峰市人，讲师，2004级博士研究生． 通讯作者：侯先志(1948~)，教授，山西新县人，博士生导师． 第2期 刘 占英等 一株分解纤维素的肠球菌的分离鉴定 1．1．2 样品采集 ：样品采 自日粮精粗 比为3：7的装有永久瘤 胃瘘管的绵羊． 1．2 方法 1．2．1 菌种初筛：将瘤 胃液样品梯度稀释到1O-5倍，在CO。保护下倒平板．将倒好的平板放在厌氧罐 中于39。C培养箱中培养约24h，待平板中长出菌落，挑取有透明圈的单菌落镜检观察是否为单一菌 种，若是单一菌种，留存以备复筛之用，若不是单一菌种，继续进行分离纯化． 1．2．2 菌种复筛：将初筛得到的有透 明圈的单一菌种在培养基B上39℃培养12h，制成种子液．然后 按2O％的接种量将种子液接种到装有15mL培养基C的25mL西林瓶中，并做不接菌的空白对照，将 二者同时在39℃培养，观察接有菌液的西林瓶中滤纸的降解情况．经 目测，滤纸条出现明显孔洞、分 层、边缘溶解等现象的视为该菌种能降解滤纸，选出滤纸降解速度较快、滤纸降解程度较大的菌种作 为复筛菌种． 1．2．3 血清瓶产酶实验