一株曲霉的一种中温糖化酶的纯化及其部分酶学特性.pdfVIP

基因组学与应用生物学，2010年，第 29卷，第3期，第 434—440页 GenomicsandAppliedBiology，2010，Vo1．29，No．3，434—440 研究报告 A Letter 一 株曲霉的一种中温糖化酶的纯化及其部分酶学特性 莫德姣 刘君梁 ， 冼亮 段承杰 -2，‘冯家勋 1广西大学生命科学与技术学院，南宁，530005；2广西亚热带生物资源保护利用重点实验室，南宁，530005；3广西微生物及植物遗传工程教育 部重点实验室，南宁，530005 通讯作者，jxfeng001@163．com 摘 要 本研究从广西花坪 自然保护区采集的土壤中筛选获得 了一株产糖化酶丝状真菌菌株 57—45，通 过形态学观察和真菌内转录 问隔区(internaltranscribedspacer，ITS)序列比对分析，将其初步鉴定为 曲霉属 似spergillussp．)的一个种 。纯化真菌 57—45所产的一种胞外糖化酶经过硫酸铵分级沉淀、疏水层析和阴离 子交换层析三步蛋白质纯化步骤，得到在 SDS—PAGE上约 60kD 的单一蛋 白质条带，薄层层析分析表明 该纯化的蛋 白质水解可溶性淀粉 的产物只有葡萄糖，证明该纯化的蛋白质为糖化酶。纯化的糖化酶 值 为 1．9mg／mL，V 为 4148ixmol／(min·mg)，最适作用 pH5．5，最适作用温度 50~C，在 同步糖化发酵中有 应用的潜力。金属离子 Fe、Zn2、Cu 对酶活有较强的抑制作用，EDTA对酶活有较强的促进作用。本文 结果将为进一步研究曲霉糖化酶的酶学特性提供新的材料。 关键词 曲霉，糖化酶，蛋白质纯化，酶学特性 PurificationandPartialCharacterizationOfaMesophilicGlucoamylasePro— ducedbyanAspe llusStrain MoDejiao LiuJunliang1,2,3XianLiang DuanChengjie12,,3FengJiaxun，， 1CollegeofLifeScienceandTechnology,GuangxiUniversity,Nanning，530005；2GuangxiKeyLaboratoryofMinistry ofEducationforMicrobialand PlantGeneticEngineering，Nanning，530005；3GuangxiKeyLaboratoryofSubtropicalBioresourcesConservationandUtilization，GuangxiUniversiyt, Nanning，530005 Correspondingauthor，jxfeng001@163．CO1TI DOI：10．3969／gab．029．000434 Abstract Inthisresearch，filamentousfungalstrain57—45whichproducedglucoamylasewasisolatedfrom a soilsamplecollectedrfom theHuapingNatureReserveofGuangxi．Fungus57—45wasidentifiedasAspergillus sp．bymorphologicaland internaltranscribed spacersequenceanalysis．One extracellularglucoamylasePro— ducedby thisfungus57—45waspurifiedina3一stepsprocedureinvolvingammonium sulfateprecipitation，hy- drophobicinteractionchromatographyandanionexchangechromatorgaphy．Thepurifiedproteinshowedasin— glebandofabout60kD molecularmassonsodium dodecylsulfate—polyacrylamidegelelectrophoresis．Thethin layerchromatorgaphyanalysisshowedthatthepurifiedproteinreleased glucoseassoleproductrfom soluble starch，confirmingthatisaglucoamylase．TheKmandV are1．9mg／mLand4148ixm