丝状真菌表达分泌系统中受体菌的构建.pdfVIP

卷 期 生 物 工 程 学 报 ! # ’( ) ! *’ )# 年 月 $%%$ !! !#$%% ’()*$+, (- .#(/%0$(,(12 *’+,-.,/ $%%$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 丝状真菌表达分泌系统中受体菌的构建 ! $ ! ! ! 刘 丽 刘 谨 仇润祥 朱兴国 唐国敏 ! （中国科学院微生物研究所，北京 !%%%% ） $ （山东大学，济南 $1%%%!） 摘 要 黑曲霉糖化酶高产菌株 经紫外诱变后，通过酪蛋白平板和蛋白酶活性测定筛选出胞外酸性蛋白酶活 5$! 力仅为原株% C4# D 的菌株3 ) $#1%*5$!0$%!，其生长特性和产糖化酶活力与原株基本一致。利用原生质体0E7F 法将 含有报告基因45 的表达分泌质粒GF5!%045 通过与选择标记质粒的共转化导入此蛋白酶部分缺陷株及其原株 5$!，检测在蛋白酶缺陷株36%*1#,,) $#1%* 5$!0$%! 和原株5$! 中H. 的分泌表达，结果表明在 3 ) $#1%*5$!0$%! 中 表达水平显著高于原株，但 却显示在两菌株中 基因的转录水平近似，由此证明酸性蛋白酶缺 H. *’/:@,/B .(’: 4$5 陷对保护外源蛋白产生了显著效果。 关键词 黑曲霉 ，蛋白酶缺陷株， ，表达 分泌 5$! H. 0 中图分类号 文献标识码 文章编号 （ ） I4# J !%%%03%#! $%%$ %#0%##40%2 黑曲霉作为外源基因表达系统比其它微生物表 种保存、活化，用查氏培养基。黑曲霉发酵培养基 达系统（细菌，酵母）具有如下的独特优点：高分泌 淀粉， 酵母粉， ， 玉米粉。 # D $ D % C1 D UH EV % C1 D $ 2 性能，高强度启动子，完善的翻译后加工及成熟的 检测蛋白酶分泌活性的酪蛋白平板成分为 !D 酪蛋 发酵工艺。但黑曲霉自身蛋白酶对外源蛋白的降解 白（溶于 的 乳酸缓冲液）， 明胶 GH 2 C% % C !-’(W T !D 成了提高目的蛋白产量的主要障碍。实践证明，通 和!C$ D 琼脂。检验淀粉水解酶分泌的淀粉平板成 过诱变或基因敲除来筛选蛋白酶缺陷株，是克服这 分为 淀粉， 明胶和 琼脂。糖化酶活性 !D !D !C$ D