双峰驼诱导排卵因子活性位序列测定与肽链结构研究.pdfVIP

中国兽 医科技 第 32卷 第 ll期 2002年 3 双峰驼诱导排卵因子活性位序列测定与肽链结构研究 潘光武 ，谢庆 阁 ，才学鹏 ，刘湘涛 ，肖昭彭 ，梁 仲 ，贾士琴 l_中国农业科学院 兰州兽医研究所．甘肃 兰州 730046；2．中国科学院 北京遗传研究所 ．北京 100031) 摘要 ：应用高效液相色谱仪 、蛋 白顺序仪和傅里叶变换离子回旋共振质谱仪等仪器 ，纯化并测试 了公驼诱导排卵因子 (()IF)的部分活性序列和 降解过程 。结果表 明，公驼 ()IF是单链 多肽 ，分为活性序列和相对稳定固定序列两部分，N一端的 活性位序仅为 6个残基 ：赖氨酸一缬氨酸一丙氨酸一苯 丙氨酸一丝氨酸一苏氨酸 。该 因子 的氧化 降解过程在冰冻条件 下是 由氨 基酸侧链基 团的氧化和肽链 的断裂共 同引发 的。 关键词 ：双峰驼 ；诱导排卵因子 ；活性序列 ；降解 中图分类号 ：S858．24；S8l4．1 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000-6419(2002)l1-0003-03 双峰驼是精液诱导排卵 的哺乳动物 ．将 公驼精液经 阴道 性组分 L：在 HPLC上继续分离 ．固定相为二醇大孔硅胶 DioL一 输入或肌 肉注射 ．均可诱导母驼排卵。母驼在肌 肉注射公驼精 1000柱 ．流动相为 0．25mol／LPBS(内含 0．75mol／LNaC1)等 清 4．8h后 ．外周血浆促黄体素 (LH)达峰值 (2．03ng／mL± 度洗脱 ，在波长 280nm处重复收集活性组分 Lz．z。一。最后将活 0．71ng／mL)．为肌肉注射前 LH基础水平 的2．64倍 ．并在肌 性组分 Lz在反相 HPLC的 ODS柱上 ．用 100mL／L乙腈水 肉注射后 36448h诱发排卵 因此．推测公驼精液 内存在一种 (内含 0．5mL／L三氟乙酸)做等度洗脱 ．在波长 254nm处收集 类似 GnRH 活性物质 ．称为诱导排卵因子 (ovulationinducing 纯化 的 ()IF(I )．真空冻干 ．充纯氮气 ．保存于一25℃。 factor．()IF)l2一。该因子在公驼精液介质 内相对稳定、耐热和耐 1．4 OIF的 N一端 活性序列测定 pH变化 ．可用生化技术提取并加 以纯化 。1993～1998年笔 将纯化的OIF样 品2O g溶于样 品稀释液 内，0℃下待其 者从公驼精清 内提取纯化 出一种 74肽 的GnRH类似物 ．经对 充分溶解后 ，立即加到 ProSpin的 PVDF膜上 ，0℃ 4600×g离 该生物活性物质的生化特性和结构进行研究．确定该活性物质 心 6h，然后剥离 PVDF膜 ．采用 ABI一476A蛋 白序列分析仪 ．按 即 ()IF．并检测 了 2O个多肽 的位序。本研究 旨在分析该 因子 的 程序测其纯度 、标样后 ．测定 ()IF活性位序列 。 活性序列及其特性 ，为阐明双峰驼诱导排卵的机理提供 理论 1．5 oIF多肽序列降解 的测定 基 础 。 将未用氮气保护的 ()IF纯品于一25℃冰箱存放 1年 ，然后 将样 品移 出20 g．立 即在傅里叶变换离子回旋共振质谱仪 内测 l 材料 与方法 ()IF分子量 ．根据测试结果分析其降解过程。 1．1 仪器 2 结果与分析 BrukerLC一3l型高效液相色谱仪 (HPLC)：用于分离、纯化 ()IF；ABI一476A蛋白序列分析仪 ：用于确定 ()IF的多肽活性序 2．1 OIF的活性位序列测定 列 ；APEX Ⅱ傅里 叶变换离子 回旋共振质谱仪 (APEX Ⅱ一FYI— 用大量超纯水 、光谱纯或进