四甲基氯化铵在PCR扩增小麦基因中的关键作用EssentialRoleofTetramethylAmmoniumChloridef.pdfVIP

遗传HEREDITAS(Beijing)19(2):1一41997 ·遗 FI专 快 报 · 四甲基氯化按在PCR扩增小麦基因中的关键作用① 廖玉才② 李和平 华（中农业大学作物遗传改良国家重点实验室、武汉 430070) RainerFischer 德（国亚深技术大学植物及分子遗传研究所．亚深 52056) 摘 要 利用高简并性引物，用PCR法从小麦DNA或 cDNA中合成小麦几丁质酶基因、葡聚糖酶基 因和苯丙氨酸解氨酶基因片段 在 PCR反应中添加四甲基氯化按(TMAC1）是合成这些特异基因片段的 关键 ‘合成的PCR片段都经末端补齐和磷酸化后用于克隆。核酸序列分析证实，这些PCR产物分别与 用于设计PCR引物的基因具有高度的同源性。 关键词 PCR，四甲基氯化按，几丁质酶、葡聚糖酶，苯丙氨酸解氨酶 EssentialRoleofTetramethylAmmoniumChlorideforAmplification ofWheatGeneSequencesbyPolymeraseChainReaction(PCR) LiaoYucai LiHeping (StateKevLaboratoryofCropGeneticImprovement,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan430070) RainerFischer (InstitutfurBiologie1(Botanik／Molekulargenetik),RWTHAachen,D-52056Aachen,Germany) Abstract Inthepresenceoftetramethylammoniumchloride(TMACI),achitinasegenesequence,a phenylalanineammonia-lyasegenesequenceandaglucanasecDNAsequenceofwheatwereamplified withhighlydegenerateprimersbyPCR.TheinclusionofTMACIinthePCRreactionswasessentialfor successfulamplificationofthedesiredsequencesfromgenomicDNAorcDNAinwheat.Theendsofthe PCRfragmentsweremadeflushandphosphorylatedpriortocloning.Sequenceanalysesoftheabove PCRfragmentsconfirmedtheiridentities,showinghighsequencesimilaritiestothegenesusedforthede- signofPCRprimers Keywords PCR,TMACI,Chitinase,Glucanase,Phenylalanineammonia-lyase PCR是现代分子生物学研究中最常用的技术之一。但是，对于一些基因组大、重复序列多的生物，运用这 一技术也往往会遇到一些困难，如大量非特异性产物同时扩增严重干扰特异产物的分离与鉴定。因此，探索适宜 的PCR反应条件，以获得尽可能多的特异PCR产物是成功地利用这一技术的关键。普涌小麦(2n=42)的染伊体 ①国家自然科学基金资助的课题。 侈廖玉才 男，42岁，博士 教授、研究方向为植物分子生物学。 ） 遗 传 HEREDITAS(Beijing)1997 19卷 组大，其单倍体核DNA高达16.6pg(1)，是水稻的40倍，玉米的20倍。其中75％以上是高度重复序列’〔〕。尽 管小麦细胞遗传学的研究相当深人，但这些特点给开展小麦分子生物学研究增加许多困难。一些在其他作物中应 用得十分成功的方法用于小麦则需要进一步改进，从而导致小麦分子生物学的研究远远落后于其他作物 本文