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大鼠RVLGcDNA的克隆_原核表达和小鼠抗RVLG蛋白多克隆抗体的制备.pdf
生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, November 25; 24(11): 1981-1987
Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061
cjb@ © 2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved
研究简报
RVLG cDNA RVLG
张平, 邢万金, 包晓红, 刘志达, 王连庆, 李舜尧, 乌日嘠
, 010021
: 为了识别大鼠卵巢中的生殖细胞, 在原核系统中表达和纯化 RVLG 蛋白并制备了多克隆抗体。采用 RT-PCR
方法从大鼠睾丸组织中扩增获得RVLG cDNA 片段, 然后克隆到pMD19-T 载体上进行测序, 经双酶切回收目的基因片
段后, 将其插入到原核表达载体pGEX-4T-1 上, 转入大肠杆菌 BL21(DE3) 中诱导表达。纯化后的GST-RVLG 融合蛋白
免疫昆明(KM) 小鼠, 最后给小鼠腹腔注射S180 细胞制备抗RVLG 腹水多克隆抗体。用Western blotting 及免疫组织化
学法鉴定RVLG 腹水多克隆抗体的特异性, 间接ELISA 法测定该抗体的效价。序列分析表明, 所克隆的RVLG cDNA 片
段比GenBank 中报道的大鼠RVLG cDNA(NM_001077647) 多60 bp, 原因是由于RVLG 的可变剪切方式造成的。本研究
成功构建了重组表达质粒pGEX-RVLG, 且GST- RVLG 融合蛋白在大肠杆菌BL21(DE3) 中高效表达, 表达的目的蛋白占
菌体总蛋白的10%以上。制备的抗体可特异性识别RVLG 蛋白, 其效价达 1:20 000。获得的高效价、高特异性的小鼠抗
RVLG 蛋白腹水多克隆抗体为下阶段研究RVLG 的特异性表达奠定了基础。
: RVLG , 原核表达, 多克隆抗体
Cloning, Prokaryotic Expression of Rat RVLG and
Preparation of Mouse Anti-RVLG Polyclonal Antibody
Ping Zhang, Wanjin Xing, Xiaohong Bao, Zhida Liu, Lianqing Wang, Shunyao Li, and Riga Wu
Department of Biology, School of Life Sciences, Inner Mongolia University, Hohhot 010021, China
Abstract: In order to identify rat ovarian germ cells, we expressed and purified rat RVLG protein in Escherichia coli cells and
prepared a mouse anti-rat RVLG polyclonal antibody. The rat RVLG cDNA was obtained from rat testicle tissue by RT-PCR and was
cloned into the vector pMD19-T.
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