猪繁殖和呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)3%27末端非翻译区中调控序列的研究.pdfVIP

猪的传染病 蛋白可被特异性多克隆抗体识别(图2．7)- 圈2．7c2x．N重组表达质粒表达产物的wist哪!．bIot分析结果 3讨论 本文将广东地区某个猪场PRRs野毒株与疫苗株N蛋白基因同时克隆，得到N蛋白基 因组序列，并对其分析，发现两毒株之间同源性达到lOO％。证明PRRS毒力的强弱与N蛋 白几乎无关系。其基因相对保守。而弱毒疫苗的致弱主要发生在其他结构蛋白内。 而野毒株N蛋白克隆到表达载体PMAM2X，并在大肠杆菌TBl表达时．能以麦芽糖 结合蛋白(MBP)的可溶性形式得到高效表达．经w酏m-blot证实表达产物与猪抗PRRs 阳性血清发生特异性反应，可作为PRRSV抗体的诊断抗原。 国内外许多学者分别利用不同的表达载体对PRRsV核衣壳蛋白基因进行了原核表达， 其中部分报道还对核衣壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达方式进行了分析，结果均以包涵体 形式存在。本实验通过对各种表达条件的优化，实现了对PⅪ塔核衣壳蛋白在原核表达系统 中的可溶性表达，从而使MBP-N的纯化制备更为方便。同时也对Amylose预装柱亲和层析 时通过改变缓冲液的不同离子浓度，为大量制各纯化的MBP-N奠定了基础。 参考文献略 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)3’末端非翻译区 中调控序列的研究 孙志‘．王金勇1．张建武。，秦爱健2，袁世山”‘ (1中国农业科学院上海善医研究所，中圜动物卫生与泷行病学中·长上海分中心动物传染病防治研究室 2扬州大擘善医学院江苏扬州225009) 农业部动轴寄生虫病重点实验室上海200232： 擅要以北荚株Pl剐毒杂性克隆pcBc2为平台进行反向遗传操作，将3’m中的一级结构进行了承 列缺失或插入突变，井改变二级结构中的一个保守的茎环结构，构建全长PRRsV突变体克隆，解析3’I瓜 3’U丌t的启动子序列覆二级蛄构．即夏制过程中的最小 突变对病毒感染性的影响，旨在界定调控PRRsv 调控元件．辨空斑和№r吐啪BIot来研究拯救后重组病毒的复制、转录和生长特性，发现重组病毒感染动 nt)与插 3’u1R的5’端可耐蹙一定敷目的核苷酸的缺麦(4I 力举与索本藕毒无可见差别．蛄果表明PRRsv 入C23哟突变，但进一步9m缺失适成保守的环结构突圭后就使病毒失去了悫隶性．证明了这是3’U1R中控 制PRRsv复制过程的的曲需序列夏二衄结构，为进一步解析PRl塔V复制过程的调控元件奠定了基础． and 猪繁殖与呼吸障碍综合征(Porc．meReproductiveRespi胁ryS”dro眦，PRRS)，俗 作者简介：孙志(1979~)，男。内蒙古包头人．实习研究更，主要从事分子病毒学方面研究 通讯作者：袁世山·1H：02lE．mail：shishanyu锄@ho仃n蝴．o咖 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会‘ 称“蓝耳病”，首先发现于上世纪八十年代末llJ。其致病病原为猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒 (PRRsV)，于九十年代初相继分离于欧洲和美国，并迅速的成为危害养猪业的重大疫病。 炎病毒是一种有囊膜、核衣壳为正二十面体对称的单股正链RNA病毒。PRRsV全基因组长 约1sKb，其基因组结构为不分节段、有5’端帽状结构和3’pol“A)尾的正义RNA．左端5’ 长llo-i如nt．像其它正链RNA病毒一样，动脉炎病毒的3’咖t对病毒的整个复制过程起 着重要的调控作用pl。黄病毒科和冠状病毒科的病毒3’uTR较长，且能够独立的构成病毒复 anerivims)和PRRsV中，试验证 制所需的顺式调控元件Hj川，在马动脉炎病毒(Equim L、，株 明其3’端的顺式调控元件延伸到了上游的