西部生态保护和莱姆病传播关系的研究.pdfVIP

第九届全军流行病学·第八届全军防生物危害医学专业学术会议论文集 西部生态保护与莱姆病传播关系的研究 刘增加1孙毅2何静3 1兰州军区疾病预防控制中心兰州730020 2军事医学科学院微生物流行病学研究所，病原微生物生物安全国家重点实验室北京 100071 3甘肃农业大学草业学院兰州730070 莱姆病是山们氏疏螺旋体引起的一种蜱媒自然疫源性疾病，它与许多虫媒自然疫源性疾病一 样，是由媒介昆虫、宿主动物和病原体在特定自然地理景观条件下构成的生态系统，生态环境保 护也就是对恢复与保护原有的生态系统，这种恢复与保护势必影响虫媒自然疫源性疾病的流行特 征。为了解西部大开发中生态环境保护与重要蜱媒莱姆病的关系，作者于1993年3，J至2006 年6月问在甘肃省迭部(北纬34．20，东经1040)腊子口天然林保护区、苗圃林半保护区和农_k 开垦区作了较系统的研究，兹将结果报告如下。 l材料与方法 1．1样地选择依据西部生态环境和莱姆病的生态学、生物学历史资料选择了甘肃省迭部林 区腊子El：个样地，天然林保护区：设在腊子口龙爪沟林区，该区为天然亚热带水源涵养原始森 林区，面积约85．60km2，以冷杉、云杉、柏杉、落叶松、桦木等为主要分布树种，几前未经任 何采伐作为受到充分保护的天然林区。苗圃林半保护区：设在腊了U达拉沟林区，该区与龙爪沟 林区相距约30公里，为苗圃林，面积为83．20kin2，树种以冷杉、云杉为丰，均为未成林的苗圃。 农Hk丌垦区：设在腊了U朱立沟农区：该区与上述二个样区距离均在30公里以上，以农为丰的 农牧混交区，面积约76．38 km2，丰要种植蚕再、小麦等农作物，植被以低矮灌丛和阔叶栎树为 主。 1．2材料人血：采白迭部腊子口林区两个样地长期(1年以上)居住人群的上肘窝静脉血。 仪器和试剂：除荧光显微镜、喑视野显微镜、多功能显微镜和普通试剂等由兰州军区疾病预防控 制一I·心提供，其余均…军事医学科学院微牛物流行病研究所提供。莱姆病螺旋体菌株B．gannii 验动物中心提供。 1．3方法 1．3．1蜱类及宿主动物的采集游离蜱类的采集：采用拖旗法进行，分类记数后计算密度。 啮齿动物的采集，夹夜法捕获，每隔10m布夹，晚放晨收。将捕获的啮齿类动物装入鼠袋用乙 醚麻醉15min后，采集体外寄牛蜱，将采获的蜱放于75％酒精巾浸泡。动物体表消毒后，取心、 肝、脾、肾等脏器立即冷冻备用。 1．3．2人群血清流行病学调查依据作Nk环境，分别提取在天然林保护区和苗同林半保护区 常年工作、年龄在20一40岁的员工，采用闯卷和血清抗体检测相结合的方法进行调查研究，血清 学检测以美国标准株B31为参比抗原，国内优势分离株Rgarinii为抗原，采川问接免疫荧光方 法进行，以抗体滴度大于l：128为阳性感染。 1．3．3自然感染莱姆病螺旋体的检测蜱类丛囚组DNA的制备：标本蜱先用无菌水洗涤2 次，在65(2烘箱烘十后用移液枪头研磨为粉末状，冉用TE缓冲液(10ramTrisHC!，1mM EDTA，pH7．6)溶解。98℃煮沸10 minutes。取上清液．20℃冷贮备用。莱姒 min后30009离心5 EDTA50mM 磷酸缓冲液(PBS)清洗2．3次，加入200IlI．TE缓冲液，然后用SET(25％蔗糖，50raM Tris—HCi 第九届全军流行瘸学·第八届全军防生物危害医学专业学术会议论文集 消化过夜，用等体积酚—氯仿抽提，加入3MN“c调节离子浓度到O．IM，DNA用2倍体积的无 水乙醇沉淀，为％预冷乙醇洗涤，风干后用30uL，1E溶解，-2012冷储备用．鼠类基因组DNA 的铡备：取待检潞佯品约30mg，研磨碎后加入适量DNA裂解液(TEpn=7．6：o．5％SDS：0．5mg／mL 重复煮沸，冷冻2次)裂解细胞释放DNA后，离心取上清液，采用酚．氯仿法抽提基因组DNA， 无水乙醇过夜沉淀．干燥后用TE缓冲液溶解，．20℃冷贮作为模板。PCR检