(三)某些重要学科的研究方法.ppt

包括： 细胞生物学 分子生物学 神经科学 病理学 细胞生物学 细胞水平的研究 对恶性肿瘤细胞生长的影响（生长曲线） 2. 对恶性细胞增殖的影响（分裂指数测定，成集落实验） 对恶性肿瘤细胞代谢的影响（DNA，蛋白质合成的影响） 4. 器官培养实验 动物水平的研究 对致瘤动物的治疗作用 2. 动物的肿瘤细胞接种实验 分子水平的研究 对已知癌基因与抑癌基因的作用 2. 发现未证明的基因或抑癌基因 关 于 对 照 配对的细胞（SV3T3-3T3） 癌细胞与正常或原代培养细胞 3. 癌细胞，癌旁组织细胞及正常细胞 分子生物学 细胞的转化试验（细胞的选择） 动物的致瘤试验（动物的选择） 对癌基因，抑癌基因的分析 最关心的共同问题 一般设计原则 如何从遗传学角度确定疾病的致病基因或易感基因？ 对一个感兴趣的基因如何研究其功能？ 医学分子生物学实验设计中常见的毛病 实例分析 神经科学现代研究方法 一、形态学方法 束路追踪法：轴浆运输追踪、变性束路追踪、神经元质膜荧光染色 化学神经解剖法：酶组织化学、免疫组织化学、免疫电子显微镜 原位杂交法 受体及转运体定位法 神经系统功能活动形态定位法：脱氧葡萄糖法、Fos法、细胞色素氧化酶法 形态学的观察法（Confocal） 二、机能学方法 1. 神经递质释放量的测定 推挽灌流 脑内微透析术 伏安法 脑片 突触体 抗体微探针 2. 神经递质的功能测定 微电泳 抗体微量注射 3. 行为方法 经典条件反射 操作式条件反射 三、电生理学方法 细胞外记录 细胞内记录 脑内电刺激 电压钳 膜片钳 脑电波 诱发电位 四、脑成像方法 X线脑室造影 X线脑血管造影 脑超声 计算机辅助体层摄影（CT） 磁共振成像（MRI） 正电子发射体层摄影（PET） 单光子发射计算机体层摄影（SPECT） 五、其他 突触体、突触体膜和突触小泡的分离与制备 反相HPLC 受体的放射配体结合分析法 RT－PCR Northern Western Southern 等等 病理学 病理研究的范围和内容 基础科学 → 临床医学 疾病病理形态学的演变规律 疾病发病机制 发病机制过程中的形态变化 疾病的分子改变 疾病发病过程中的分子变化 形态学改变和临床表现的关系 病理改变在预后判断中的价值 病理研究设计原则 科学循证的原则 合理对照的原则 实事求是的原则 符合统计学原则 病理研究设计的要点 从临床实践中发现问题、提出问题 用适当的科学方法研究问题 实事求是总结问题，找出科学规律 技术的选择 依据问题决定使用的技术 以问题为中心，从不同层次应用不同的技术 注意细节 病例 —— 宁缺勿滥 材料 —— 准确真实 细胞系 —— 性状，明确无误 组织 —— 纯净 激光捕捉 单细胞 显微切割 精确定位 * 某些重要学科的研究方法 The key to every biological problem must finally sought in the cell —— E. B. Wilson, 1925 假如你想探索一种化学药物有无抗癌作用 假如你想研究一种药物有无致癌作用 如何从分子遗传学角度确定疾病的致病基因或易感基因？ 对一个感兴趣的基因，如何研究其功能？ 确定被研究群体：获取临床标本 ↓ 选择候选基因：从定位区域或文献报道的候选基因中选择 ↓ 多态性检测：采用测序法确定SNP或RFLP ↓ 基因分型（genotyping）：采用高通量方法对每个标本进行基因分型 ↓ 单倍型分型（haplotyping）：采用软件算法（PHASE algorithm 或 DnaSP3.5 algorithm等）、四配子试验。 ↓ 数据分析：等位基因关联分析 ↓ 单倍型关联分析 生物信息学分析 结构域 序列特点 亚细胞定位 相互作用蛋白 参与pathway、信号途径 已知某些功能及作用 （重复序列、pi位点等、启动子、切接位点） 例：亚细胞定位：荧光蛋白显示、免疫组化：分子相互作用：酵母双杂交、pull－down、Co－IP 机理研究: 细胞分子水平 转染（共转染）实验 RNAi 反义 突变实验 阻断剂（抑制物） 激活剂 体外实验体系 动物整体水平 转基因动物 基因敲除动物 疾病模型 没有对照或不严格的对照，难以判断结果正确与否 实验设计太简单，机理研究不够，影响研究水平 文题不符，结论不妥 目的：在整体水平上证明肝A