人体肠道菌群定量技术研究进展.pdfVIP

第22卷第3期 航空航天医学杂志 2011年3月 281 人体肠道茵群定量技术研究进展 姜美娟，梁冰 (中国人民解放军第401医院检验科，青岛 摘要在传统微生物学研究中，人们只重视致病茵的作用，而没有重视正常茵群的作用。通过对肠道茵群 的分布特点和生理功能的了解，我们认识到肠道茵群的微生态平衡与人的健康及疾病的密切关系系。针对传统 培养方法存在的问题，国内外专家先后开展了分子生物学方法的研究和生物学评价工作。本文结合本课题组的 研究，对各种技术的特点及存在的不足进行了全面的论述。 关键词肠道茵群；定量技术；进展 中图分类号：R445．6 文献标识码：B 正常菌群在人体内分布很广，其中以肠道菌群最具有 床意义不大。细菌总数减少则与肠道菌群失调存在密切 代表性。对健康人的粪便标本研究已知，肠道内柄息着大 关系，应引起重视，并结合细菌类别构成等指标进行综合 约400—500种微生物，其中包括细菌、真菌和病毒等。这 评估。由于通过涂片镜检的方法无法精确区分细菌种类， 些微生物的总质量约为1ks，其体积相当于1个人的肝脏。 一般就细菌形态和染色性将细菌分为4大类，即革兰阳性 其数量为l014个，是人体自身细胞总数的10～20倍…。杆菌、革兰阴性杆菌、革兰阳性球菌、革兰阴性球菌，通过 在常见的十几种细菌中，绝大多数为专性厌氧菌，约占 计算4者的比例来评估肠道菌群的特征。具体计数方法 99％以上，包括双歧杆菌、乳杆菌、优杆菌、拟杆菌、消化链 为：计数1000个细菌中各类细菌的百分率。可先计数部 球菌等，也有少量的兼性厌氧菌、专性需氧菌和微需氧菌， 分视野中(如1／8视野)各类细菌数，然后估计全视野中的 如肠杆菌属细菌、肠球菌、葡萄球菌、酵母样菌等。’它们构 各类细菌数旧J。该方法虽然由于所需设备简单，操作简 成了人体胃肠道的生物学屏障。肠道正常菌群与宿主、菌 便，耗时短，很适宜临床应用。但是并不能完全反映肠道 群中各种微生物之间相互依存，相互协调，处于动态平衡。 菌群的状态，更不能对细菌种类及数量进行精确定量，而 大量研究表明，肠道正常菌群对宿主具有消化、吸收、营 且操作过程受主观凶素影响较大，不易于推广。 养、生物拮抗等生理作用，实际上已成为宿主生命的必需 2活菌定量培养计数法 的组成部分。当这些正常的微生物群落受宿主及外环境 影响，其种群数和菌量、活性发生了异常或定位转移时。 数的方法，即将一定质量的粪便标本，悬浮于PBS中，经连 这些群落中就容易容纳外籍菌，原先的平衡遭到破坏，出 续10倍稀释。分别接种于不同的选择培养基中，进行培 现菌群失调。在人体抵抗力降低的情况下。如瘦弱婴幼 养。对不同培养基选取最佳分布菌落进行计数，并根据其 儿，年老体弱和患急、慢性疾病者，以及长期使用广谱抗生 相应稀释倍数而得到细菌在标本中的含量。此法可以同 素、免疫抑制剂、肾上腺皮质激素、抗肿瘤药物和放射治疗 时显示肠道菌群的多样性和比例构成。但是，目前选择性 者，尤其是应用广谱抗生索者，可使肠道正常菌群被抑制 培养基并不能真正做到完全特异性选择，仍有85％的肠 而数量减少，耐药的过路菌过量繁殖，造成肠道菌群失调， 道菌群无法培养得到。而且稀释平皿接种费时，通常孵育 同时，肠道菌群的失调还会加重某些疾病的严重程度。因 需2—3 d，如果微生物分布不均，呈链状或成丛，则导致低 此确切了解肠道菌群变化及对肠道菌群进行精确定量对 估真正菌数。平皿接种中的氧化作用会杀死像双歧杆菌 疾病的诊断有着重要的意义。 这样的厌氧菌，影响菌数的估计。 1宣接镜检法