明胶酶检测方法研究进展.pdfVIP

第29卷第1期(第70页) 湖北民族学院学报·医学版 V01．29No．1P．70 of 2012 2012年 Hubei forNationalities·MedicalEdition Joumal University 明胶酶检测方法研究进展 陈秋凤1，周防震2 1．湖北民族学院附属医院(湖北恩施445000) 2．湖北民族学院生物科学与技术学院(湖北恩施445000) 【关键词】明胶酶；检测方法；进展 【中图分类号】R739．87【文献标识码】A 【文章编号】1008—8164(2012)o卜0070—02 明胶酶，亦称Ⅳ型胶原酶。1o、基底膜性胶原 中的底物明胶；最后进行显色、脱色后可见蓝色背景 下的白色条带。该方法系最早建立的明胶酶检测方 酶心1等，属于基质金属蛋白酶(Matrixmetalloprotein． ases，MMPs)范畴，包括明胶酶A(MMP一2或称法，是目前最为常用的明胶酶检测方法，分为酶原和 72kDaⅣ型胶原酶)和明胶酶B(MMP一9或称92kDa活化型酶两种形式，费用低、简便、敏感，适合血浆、 Ⅳ型胶原酶)，可降解Ⅳ型胶原、明胶和V型胶原等 组织细胞蛋白提取物或细胞培养上清等多种形式样 J、免疫∞1与 基底膜成分，在组织炎症旧J、纤维化Hj 本的分析，但只能半定量分析MMPs活性，且需要组 肿瘤转移棚。等诸多过程中发挥重要作用。明胶酶 织匀浆或血清分离等过程，容易导致蛋白降解及部 检测方法从最初的明胶酶谱法到现在采用的ELISA分酶活性丢失，也无法进行组织定位观察。 1．2 Molecular 法，从粗略定性到逐渐发展为准确定量，方法稳定 EnzChek荧光明胶酶检测法 性、可靠性逐渐完善，操作也变得更为简单。本文就 明胶酶测定方法的研究进展进行综述。 物代替普通明胶而建立起来的一种方法。主要检测 要点是：1)获得含明胶酶的样本；2)含胶原酶的样 1 基于明胶酶催化活性的检测方法 本与荧光胶体偶联物DQ一明胶共孵育，样本中的明 利用明胶酶能催化降解明胶的特点发展建立起 胶酶分解荧光明胶，释放荧光肽，荧光的增加量与样 本中明胶酶的活性成正比，利用荧光光度计结合标 来的检测方法主要有明胶酶谱法(zymography)、荧 准曲线即可定量确定明胶酶的量。该方法将明胶酶 光明胶酶法和DQ明胶(Dye—quenched—gelatin)原 位酶谱法。 的活性与化学发光技术巧妙结合，具有高敏、快速、 1．1 方便和直观等优点，适合多种形式样本的分析，特别 明胶酶谱法 Ⅺeiner等¨叫于1994建立此方 是适合明胶酶活性抑制剂的高通量筛选。但缺点在 法，是一种基于非还原SDS—PAGE电泳和反相凝胶 染色的蛋白酶检测方法。主要原理是：1)含明胶酶 于试剂盒费用高，且操作过程中仍然需要组织匀浆 或血清分离等过程，且无法进行组织定位观察。 的样本首先上样进行非还