DNA分子标记及其在冬虫夏草研究中的应用.pdfVIP

　食用菌学报 　2002 . 9 (3) :52～56 　A cta Ed ulis Fung i 文章编号 :1005 - 9873 (2002) 03 - 52 - 05 D NA 分子标记及其在冬虫夏草研究中的应用 宋敦伦 　张 　军 　 陈建新 ( 中国农业大学昆虫系 , 北京 　100094) 摘 　要 : 概述了DNA 分子标记技术的发展过程 、种类 、基本原理和特点 ,并介绍了其在冬虫夏 草研究领域中的应用和前景 。 关键词 : DNA ; 分子标记 ; 冬虫夏草 中图分类号 : S567 . 35 ; Q943 . 2 　　　文献标识码 : A 随着分子生物学技术的迅速发展 ,在生物学领域诞生了直接从 DNA 水平上进行遗传分析的 分子标记技术 。进入 90 年代以来 ,DNA 分子标记在冬虫夏草研究中也得到了广泛的应用 。 ( ) DNA 分子标记 DNA molecular marker 是以个体间遗传物质内核苷酸序列变异为基础的 遗传标记 ,它可以反映生物个体或种群基因组的差异 ,而这种差异可以通过将基因组 DNA 经 限制性内切酶酶切 、PCR 扩增 、分子杂交等技术在凝胶电泳上检测出来 。与传统的形态学标 记和同工酶标记相比,DNA 分子标记具有以下几个优点 : ①直接以DNA 为表现形式 ,不受生 物的生长条件和发育阶段的影响 ,在生物的任何生长阶段都可以检测 ; ②由于基因组 DNA 的 变异极其丰富 ,分子标记的数量几乎是无限的; ③检测手段简单 、迅速 。自从 1980 年人们认识 到生物个体间DNA 序列的差异可被用作遗传标记以来 ,DNA 分子标记技术便得到了迅猛的 发展 ,相继有数十种 DNA 分子标记技术问世 。 1 　DNA 分子标记的种类 1. 1 　限制性片段长度多态性( Restriction Fragment Length Polymorphism , RFL P) RFL P 出现最早 ,也称为第一代 DNA 分子标记 ,是由Bo stein D[ 1 ] 首先提出的基于 Sout h ern 杂交技术的一种分子标记 ,其原理是检测 DNA 在限制性内切酶酶切后形成的特定大小的 DNA 片段 。由于不同来源DNA 的特定的限制性内切酶酶切位点分布不同 ,每一种DNA 与限 制性内切酶酶切所产生的片段大小都是特异的 ,从而产生了多态性 。RFL P 技术的基本步骤 是 :先将供试基因组 DNA 酶切 ,通过琼脂糖凝胶电泳分离得到片段 ,在原位进行变性后转移 至硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上 ,再用经放射性标记的 DNA 或 RNA 与固定于滤膜上的 DNA 杂交 ,最后通过放射性自显影确定与探针互补的电泳谱带位置 ,从而确定同源片段的大小 。对 于分子量较小的DNA 样本 ,也可以在酶切后对其产物直接进行电泳分析 ,得到 DNA 的 RFL P 图谱 。RFL P 标记非常稳定 ,在所有生物中的检测程序一致 ,标记数量较大 。可以用 RFL P 来 收稿 日期 : 2002 - 04 - 26 原稿 ; 2002 - 05 - 28 修改稿 3 期 　　　　　　　　　宋敦伦等 :DNA 分子标记及其在冬虫夏草研究中的应用 53 构建遗传图谱 ,但是采用 Sout hern 杂交技术的 RFL P 操作较复杂 ,成本高 ,检测中要用放射性 同位素 ,限制了它在实际操作中的应用 。 1. 2 　以 PCR 为基础的分子标记 ( ) 随着聚合酶链式反应 Polymerase Chain Reaction , PCR 技术的发展 ,诞生了许多在 PCR 基础上改进的第二代分子标记技术 。 1. 2 . 1 　随机扩增多态性 DNA ( Random Amplified Polymorp hic DNA ,RA PD) 　RA PD 是 90 年 代初由Williams J GK[2 ] 和 Welson J 分别独立发展起来的一项新的分子标记技术 ,与 RFL P 一 样 ,RA PD 也是以检测 DNA 的多态性为