DNA分子标记技术及其原理.pdfVIP

2003 年 9 月 连云港师范高等专科学校学报 Spetmber ,2003 　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　 第 3 期 Journal of Lianyungang Teachers College No. 3 ( ) 文章编号 :1009 - 7740 2003 03 - 0078 - 05 DNA 分子标记技术及其原理 许云华 ,沈　洁 (连云港师范高等专科学校 自然科学系 ,江苏 连云港 222006) 摘 　要 :综述几种 DNA 分子标记技术 :RFLP 是用限制性内切酶切割不同个体基因组 DNA 后 ,含同源序列的酶切 片段在长度上的差异 ,可靠性较高、但操作烦琐 ,信息含量低 ;染色体原位杂交是利用特异性核酸片段作探针 ,直接同 染色体 DNA 片段杂交 ,在染色体上显示特异 DNA ,准确、直观 ,但技术非常复杂 ;PCR 是模仿 DNA 在生物体内的自然复 制过程来扩增 DNA 片段 ,安全性好 ,快速易行 ;RAPD 是以人工合成的碱基顺序随机排列的寡核苷酸单链为引物 ,对所 研究的基因组 DNA 进行 PCR 扩增 ,产生多态性的 RAPD 片段 ,可以检测多个基因位点 ,但不能识别杂合子位点 ;AFLP 指纹技术是在 RFLP 与 RAPD 两种指纹技术基础上建立和发展起来的 ,有较高的稳定性 , 但对基因组纯度和反应条件 要求较高 ;DNA 芯片技术是一种以杂交测序基本理论为基础的新型生物技术 ,用于测序、基因表达、疾病诊断等 ,但造 价、探针的密度与纯度还有待完善 ;小卫星 DNA 一般与 RFLP 技术结合以获得小卫星 DNA 指纹图谱 ,信息含量高 ,但 它在染色体上分布不均匀 ;微卫星 DNA 既可用作探针获得指纹图谱 ,也可通过 PCR 方法进行微卫星位点多态性分析 , 但工作量大 ; ISSR 即内部简单重复序列 ,也是一种新兴的分子标记技术 ,具有很好的稳定性和多态性。 　　关键词 :DNA 分子标记技术 ;RFLP ;染色体原位杂交 ;PCR ;RAPD ;AFLP ;DNA 芯片 ;小卫星与微卫星指纹技术 ; ISSR 　　中图分类号:Q0523 　　　　　　　　文献标识码 :A 　　作为基因型的易于识别的表现形式 ,遗传标记在植物种 标记技术。限制性内切酶能识别并切割基因组 DNA 分子中 质资源的研究和育种工作中有着十分重要的地位。目前 ,应 特定的位点 ,如果因碱基的突变、插入或缺失 ,或者染色体结 用较为广泛的遗传标记有形态标记、细胞标记、生化标记和分 构的变化而导致生物个体或种群间该酶切位点的消失或新的 子标记。形态标记指植物的外部特征 ,细胞标记主要是染色 酶切位点的产生 ,用限制性内切酶消化基因组 DNA 后 ,将产 体的核型和带型 ,生化标记主要包括同工酶和贮藏蛋白。这 生长短、种类、数目不同的限制性片段 ,这些片段经电泳分离 3 种标记都是基因表达的结果 ,是对基因的间接反映 ,标记数 后 ,在聚丙烯酰胺凝胶上呈现不同的带状分布 ,通过与克隆的 目有限,多态性较差 , 易受环境条件的影响。而 DNA 分子标 DNA 探针进行 Sourthern 杂交和放射自显影后 , 即可产生和获 记是直接在 DNA 分子上检测生物间的差异 ,是在DNA 水平上 得反映生物个体或群体特异性的 RFLP 图谱。RFLP 分析中所 遗传变异的直接反映。DNA 分子标记能对不同发育时期的个 使用的探针通常是随机克隆的与被检测物具有一定同源性的 体、任何组织器官甚至细胞作检测 ,数量极多 ,遍及整个基因 单拷贝或低拷贝基因组片段或 cDNA 片段。 组 ,多态性高 ,遗传稳定 ,不受