NTG对庆丰链霉菌诱发产生营养缺陷型突变体的研究.pdfVIP

迪传 HEREDITAS(Beijing) 3(4): 6-81981 NTG对庆丰链霉菌诱发产生营养 缺陷型突变体的研究 赵人俊 张益桨 郑幼霞 （中国科学院上海植物生理研究所） 我们为了对庆丰链霉菌的遗传研究准备实 （三）NTG 诱变处理 验材料，应用效果显著的化学诱变剂N一甲基一 将培养成熟的斜面抱子，用含0.05％吐温 N一硝基-N一亚硝基狐 (NTG)，对庆丰链霉菌 80的生理盐水洗下，悬浮于装有玻璃珠的无菌 进行诱变处理，筛选各种不同遗传标记的营养 小三角瓶中，经旋转式摇床振荡30分钟，使抱 缺陷型突变体，并分析了这些变种类型的分布 子均匀分散，然后用四层无菌纱布过滤，以除去 和突变机理。现将我们的研究结果报告如下： 菌丝体及抱子团，即得抱子悬浮液，供诱变处理 使用。 材 料 与 方 法 称取 NTG 晶体 （瑞士产品），溶解在适量 （一）诱变出发菌株 的 Tris缓冲液 p（H9.0)中，再用移液管加人 1．庆丰链霉菌 M15(Streptomycesqingfeng- 等量的抱子悬浮液，使其达到诱变处理所需要 myceticusM15)，由野生型菌株经一系列诱变 的浓度，而后置于28℃培养室中的旋转式或往 处理得到的高产突变株。 复式摇床上振荡处理。将处理过的抱子悬浮液， 2.Q-100，由野生型菌株经高温处理所得 经适当稀释后涂布在补充有水解酪素,of吟嚓 到的丧失庆丰霉素生物合成能力的突变株。 咤混合物及各种维生素混合物的 cm 平板上。 二（）培养甚 未作诱变处理的抱子悬浮液，亦经适当稀释涂 1．完全培养基 C（M）和基本培养基 G（A) 布于 CM 平板上作为对照。28℃培养7天后， 均参照以前的报道Ell，根据实验需要，另外添加 检查菌落数，并计算致死率。同时，在 NTG处 补充物。补充物的浓度参照 Sermontillo 理过的菌落中筛选营养缺陷型突变体。 2．富集摇瓶培养基 M（M) （四）营养缺陷型突变体的性状鉴定 MM-1培养基用于M15菌株，葡萄糖10 挑取经 NTG处理过的单菌，依次点种到 克，(NHASO42克，KZHP04·3H201克， 事先经过50℃温箱烘烤30分钟的CM和GA MgS04·7H201克，NaCI1克，CaC033克， 培养基平板上，每皿点种45个。28℃培养5- 蒸馏水1,000毫升。pH7.2-7.40 7天后，选取在 GA平板上不生长、而 CM 平 MM-2培养基用于 Q-100菌株，甘油 12.5 板上能够正常生长的菌落，再点种在 CM 上制 克，天门冬酞胺1克，M9SO4·7H200.，克， 成母平板，28℃培养后，用丝绒影印法复印到 CuSq ·5H20 1毫克，ZnS04·7H20 1毫克， 分别补充有水解酪素、at吟嚓咤混合物和各种 MnS04·H2O1毫克，FeSO,·H0,7 10毫克， NaCI1克，KZHPO,·3H,O1克，蒸馏水 1,000 ZhaoRenjunetal.:StudiesonMutagenesisofAuxo- trophicMutantsofStreptomycesgingtengmyceticus 毫升opH7.2-7.40 byNTG 6 维生素混合物的GA平板上。这样，就将突变 裹 3 培养时间对，翔效果的影晌 体分类成氨基酸缺陷型、us吟at-pDt缺陷型、维生