LAMP技术及其在转基因检测中应用研究进展.pdfVIP

澎江右业种学 2014年第3期 1 LAMP技术及其在转基因检测中应用研究进展 陈 曦，张明哲，吴志毅，林晓佳，陈吴健，夏拯 (浙江省检验检疫科学技术研究院，浙江杭州 310016) 摘要：LAMP技术由于其检测灵敏度高、检测特异性强、操作简单、快速高效等优点，已在转基因检测领 域中得到广泛应用。本文简要综述该技术的原理、发展过程及其在转基因领域中应用研究的进展。 关键词：LAMP；转基因检测；进展；应用 207．3 中图分类号：Ts 文献标志码：A 文章编号：0528．9017(2014)03-0393—03 近年来，转基因作物发展速度迅猛，至2012酶，将扩增反应步骤分为2个部分进行哑铃状模板 年全球转基因作物种植面积达到1．703亿hm2，比构造的形成与循环扩增旧o。如图1所示，65℃左 030万hm2。 2叭1年的1．6亿hm2增长6％，即l 右时，FIP引物在B盯酶作用下以F2区段的3’末端 而在中国同样种植了约400万hm2的转基因棉花。为起点，与模板DNA互补序列配对，启动链置换 随着转基因作物种植面积的增加，对于转基因产品 的争议也越来越大。一方面，中国农业部在2009互补，以37末端为起点，通过链置换型DNA聚合 年审放了转基因耐除草剂水稻Bt汕优63等3个转酶的作用，一边置换先头FIP引物合成的DNA链， 基因农作物的生产应用安全证书；在2013年审放一边合成自身DNA，如此向前延伸(3)。最终F3 了抗除草剂大豆CVl27等3个品系的转基因大豆引物合成而得的DNA链与模板DNA形成双链 进口用作加工原料的农业转基因生物安全证书。另 一方面，近年中国出口的米制品屡遭欧盟通报； 链置换产生一单链，这条单链在5’末端存在互补 2008，20l1年先后2次对中国出口米制品发布决 的Flc和Fl区段，于是发生自我碱基配对，形成 议，对其抽查范围、检测力度都有加强。如何快速 单边环状结构(5)。同时这条单链DNA，又可作 准确地检测转基因产品，成为了目前热门的课题 为模板，在另一端结合BIP引物和B3引物合成一 之一。 条双链，并置换出一条单链DNA(6～7)。此时， 2000年由Notomi等…发明的环介导等温扩增被置换的单链DNA两端都存在互补序列，自我碱 isothemal 基配对后整条链呈现哑铃状构造(8)。 技7|R(100p—mediatedamplification， LAMP)是一种新的恒温核酸扩增方法，相较于传 (4) ● 哑铃状{辑构造的J磋盥丝￡t!■苗者舀音====兰喾美三 、…Ⅻ …rl…I～3 统的核酸扩增方法，具有检测灵敏度高、检测特异 Jr 二‘；二矗茹■J■叫岛、_—0一譬■兰；_； 性强、操作简单、快速高效的优点，因此越来越多 ●—●————1蕊：● ■ 被应用于转基因检测中。 111 L嶙茹————一昌．=．=o …气7紫●————一