产生大环聚酮类天然产物放线菌的分子筛选研究.pdfVIP

中国抗生索杂志2003年6月第28卷第6期 ·321· 讳 文章编号：1001 喃i”(Nk 由 田0qou、力 一论一 一著一 产生大环聚酮类天然产物放线菌的分子筛选研究 徐平“2李文均¨ 张永光1唐蜀昆1高惠英2徐丽华1贺秉坤2姜成林1 (1教育部微生物资源开放研完重点实验室云南省微生物研究所 云南大学， 昆明650091 2华北制药集团新药研究开发ee心，石家庄050015) 摘要： 目的建立～套简便、快速、高效的太环聚酮类化台物产生菌基因筛选体系，为聚酮类药物筛选 搭建一个新的技术平台；认识PKS—I基因在不同环境放线菌群中的分布规律，为新药筛选中微生物资源的定 向分离提供依据。方法 通过对太环聚酮类化合物生物台成途径所用的I型聚酮台成酶氨基酸和核苷酸序列 的同源性比较丹析，设计了一对引物用于扩增KS／AT功能域约16kb目的基因片段，依据放线菌基因组中I 型PKS台成酶基因的存在与否标定可能的太环聚酮类天然产物产生菌。结果利用建立的大环聚酮类化台 物产生菌基因筛选体系对98株嗜碱放线菌、99株链霉菌、46株嗜盐放线菌和767株稀有放线菌进行了筛选， 研究表明嗜碱放线菌、链霉菌、嗜盐放线菌和稀有放线菌I型聚酮台戒酶基因的用性率分别为265％、 20．4％、15．2％和9．35“．结论利用组合放线菌基因组DNA快速提取拄术和PKS—l基因兼并引物PCR扩 增技术建立了快速、简便、高教的太环聚酮类化台物产生菌基因筛选体系；并对不同环境条件的放线菌苗群的 PKS一1基因分布进行了研究．结果不仅表踞了放线菌PKSI聚酮合成酶分布的广泛性．而且表明极端环境放 线菌．尤其是嗜碱放线菌是大环聚酮类化舍物潜在的丰富资源．为新药筛选有效菌源的确定提供了可靠依据。 关键词； 聚酮台成酶； 太环聚酮类化合物； 聚台酶链反应；极端环境；分子筛选{放线菌 中圈分类号：Q93 文献标识码：A 聚酮类化合物是由聚酮类化合物生物台成途径合 素示踪技术阐明了聚酮类化合物生物合成机理．界定 成的化合物的总称。由于生物合成途径中构件的改变 了其与脂肪酸合成的关系。20世纪70年代后是第二 及其组合方式的千变万化，可形成的化台物的数量极 个高峰期，遗传学、分子生物学技术的应用使聚酮体生 其庞大。结构的多样性导致了生物活性的多样性。在 化研究局面得以改观，弄清了生物合成途径分子机理 至今_匕市的252个医药或农用抗生素结构中天然产物并对生物合成途径基因进行了克隆研究。已知聚酮类 为76个，其中有29个是聚酮类化合物，占38％；半合化合物分芳香环聚酮类化合物和非芳香环聚酮类化合 成药物有73个，其中13个是聚酮类化合物来源的，比物即太环聚酮类化合物两种。这两类化合物分别由lI 例居已知六大类天然产物结构的首位[1”。具重要工业 型聚酮合成酶合成途径(PKSII)和I型聚酮合成酶合 价值的聚酮类化合物主要有抗细菌和真菌类抗生素如 成途径(PKSI)合成，其中尤以PKS1途径合成的化 打霉素、两性霉素、螺旋霉素、四环素类等，免疫抑制药 合物结构多样、活性范围广著称。红霉素生物合成途径 如霉酚酸酯、西罗莫司(sirolimus，rapamycin)、FK一是第一个被克隆的PKSI生物合成途径““]。该途径 506、免疫霉索等，抗肿瘤抗生素如daunomycin、放线由三个巨大蛋白组成脱氧红霉糖胺B合成酶 菌素等，抗病毒活性的如格尔德霉素，抗虫活性的如 (DEBS)，分别由eryAI、11、11I三个基因编码。这三个 avermeclin、milbimycin、moneicin等，降血脂药如洛伐蛋白是多功能蛋白，每个蛋白由两个模块组成，每个模 他汀、普伐他汀等。这些抗生素几乎都是由放线菌特别 块需实现链延伸、还原修饰等多个功能。其中KS、AT、 是链霉菌产生的。