大鼠移植性骨肉瘤模型的建立.pdfVIP

l_墨I蓥圈!塾垄垦垒墅堡丝型坌些 !丝三!竺!!：!!兰堑 方法： 1． 收集骨肉瘤患者和正常成人血清样本各4例，血清经PROT-BA Kit试剂盒处理后，分别进行不 同的CyDye染料交叉标记，然后依次进行双向胶内差异凝胶电泳、图像扫描，并用专用分析软件 DeCyderv6．0，比较各组样本间蛋白点图像差异，并评估该技术体系。 2． 提取32例骨肉瘤患者及30例正常成人血清蛋白，用不同的CyDye染料交叉标记后，依次进行 双向胶内差异凝胶电泳以分离蛋白质、图像分析以寻找表达差异的蛋白点，对表达差异的蛋白点进 行基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱分析，获得肽指纹图谱，检索MASCOT数据库鉴定蛋白。 3． 用WesternBlot和ELISA方法，对明显的差异蛋白验证。 结果 1． 经过双向差异电泳，在所有pH4—7的梯度胶条上均得到了蛋白质表达谱，经软件处理，不同染 料标记的样本呈现不同颜色的图谱，在每块胶上均可发现数以千计的蛋白质点。使用DeCyder软件 分析发现，骨肉瘤患者与正常成人血清中差异点58个表达1．5倍以上，两者之间的差异有统计学意 义。 2． 58个血清差异蛋白点经质谱鉴定，其中的43个蛋白点得以确认。MASCOT等数据库检索肯定了 这43个差异蛋白点，其中18个蛋白质点上调，25个蛋白质点下调。 3． Western Blot证实血清淀粉蛋白(S从)和铜蓝蛋白(CP)在骨肉瘤血清中明显高表达，而肌 凝蛋白(gelsolin)在骨肉瘤血清中低表达。 4． ELISA结果显示骨肉瘤患者血清中SAA和CP的浓度高于正常人。SAA在骨肉瘤患者不同治疗阶 4-39．6 4-20．99 段的血清含量有变化(初诊未经任何治疗时含量：331．9 n∥ml，化疗后手术前含量201．3 1 ng／ml，术后含量55．6士7．33ng／ml，复发患者含量355．7士18．1ng／m1)，暗示SAA可以作为骨肉瘤治 疗效果和复发的标志。 结论 1．成功建立了骨肉瘤患者血清双向胶内差异凝胶电泳技术体系，为研究骨肉瘤发生发展分子机制 提供了一种有效手段。 2． 2．DDIGE分析结果进行质谱鉴定，PMF法成功鉴定出43个蛋白质，从中筛选出属于差异性蛋 白质43种。质谱鉴定出43个骨肉瘤相关血清蛋白质，18个蛋白质点上调，25个蛋白质点下调，为 迸一步研究奠定了基础。 3． 比较骨肉瘤和正常人血清蛋白质2-D DIGE图谱，初步确定了2个骨肉瘤上调血清蛋白点(SAA、 患者化疗前、后、术后以及复发等不同治疗阶段均有变化。 大鼠移植性骨肉瘤模型的建立 谈志龙 胡永成 王林森 于顺禄 李兰萍 王瑞琳 卢勇 300211天津医院骨研所 人骨肉瘤是临床上较常见的，也是青少年好发的恶性程度很高的原发性骨肿瘤，易发生转移及 局部快速浸润生长。因此，建立接近人类骨肉瘤临床特征的动物模型，对骨肉瘤进一步行基础性研 究和实施新治疗方法，有很重要的现实意义。本文采用大鼠骨肉瘤细胞系接种移植的方法，观察了 骨肉瘤细胞系生物学特性，对移植成瘤后影像学、病理组织学及生化指标进行分析。 289 !丝三!竺!!：!!兰生 1材料与方法