传染性胸膜肺炎放线杆菌apzC基因缺失疫苗菌株的构建及生物学特性的研究.pdfVIP

第十三次学术研讨会会议论文集 传染性胸膜肺炎放线杆菌apxC基因缺失疫苗菌株的构建及生物 学特性的研究 宣春玲1’2’3王贵平1·2 李春玲1’2罗满林3贾爱卿1·2 (1．广东省农业科学院兽医研究所，广州510640；2．广东省兽医公共卫生公共实验室，广州510640；3．华南农业大 学兽医学院，广州510642) 摘 【目的】构建猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Ac砌D6acfzf“s I 要 p拓“rDp，lP“mD，l面P，A尸P)的apxc基因与叩xⅡc I c 基因缺失突变弱毒菌株APP85，为最终研制出APP的基因工程菌苗奠定基础。【方法l以标准菌株APP259中印x 基因与apxIIc基因为目的缺失基因，根据APP I cA上下游同源臂 1型茵apx基因组序列，利用软件设计分别扩增apx 以及aDxIIcA上下游同源臂引物，构建重组自杀转移质粒，将该重组自杀转移质粒先后转移到亲本菌APP259后，利 用同源重组筛选到基因缺失突变株。并对该重组菌株主要生物学特性，如溶血性、对小鼠的致病力以及免疫保护作 用进行研究。【结果】经鉴定表明目的基因已经丢失、APP95基因缺失突变菌株丧失对绵羊血的溶血活性，毒力显著 下降，并对免疫小鼠具有良好的安全性。免疫保护性实验表明，用该菌株免疫小鼠后，不仅对同血清型菌株的再次攻击 l 保护率达到85％，对异种血清型菌株(7型)的攻击保护率达到75％。I结论】成功获得了apxc基因与apxIIc基因 缺失突变弱毒菌株，可作为预防APP感染的疫苗候选株，为最终研制出APP的基因工程菌苗奠定基础。 关键词胸膜肺炎放线杆菌；双基因缺失突变；弱毒疫苗 Acf加D6日cfff比J 猪传染性胸膜肺炎(肋rc伽Pp比比—印咒P“mD咒肠)是由胸膜肺炎放线杆菌r pZP“—印挖P“mD挖l矗P，APP)引起的一种呼吸道传染病，在临床和剖检上出现肺炎和胸膜炎的特征性症 状和病变。本病遍布世界各地养猪业发达的围家和地区，近年来流行日趋严重。 Pattison于1957年 首次报道本病…，哈尔滨兽l矢研究所于1987年发现本病的临诊病例，证明了APP在我国的存在。1990 年杨旭夫确诊并报道了本病“。。 APP为兼性厌氧菌，有两个生物型，生物1型的菌株的酶系统不完全，生长需要V因子 2型菌株有两个血清型，13型和14型。各地方流行的血清型有所差异，且小同的血清型之问的交叉保 护不强，因此给该病的预防带来极大的闲难。 APP是一种多毒力因子病原，其毒力凶子很多，现已发现与APP的致病性有关的毒力冈子包括荚 膜多糖、脂多糖、外膜蛋白、转铁结合蛋白、溶血外毒素、蛋白酶、渗透冈子、黏附凶子、菌毛、 尿素酶以及细菌对转铁蛋白携带铁的利用能力等。其中溶血外毒索足APP引起猪致病最丰要的毒力 因子M1通过结构基因序列分析和免疫血清学的研究，把APP外毒素归细胞孔形成蛋白家族的含霞复 子毒素尺7xrJR印阳捃咖胁P5fⅢcm阳Z觚州家族b1，翮Ⅸ毒素是一群可以使靶细胞膜形成孔的蛋白毒 素，常见于一些病原性的G一菌，可通过B整合素受体诱导粒细胞细胞毒性作用16、7“J。APP的RTx毒 素被称为A艇似c砌D易以cfff“rpZP“rD朋e“mDn级已．冗7x．f似训毒素，包括Ap盯、A嬲，，及A肚，，，”1…“…． 最近又报道发现了一个新的Apx毒素—A嬲以据称其只在体内表达b1。不同血清型的APP产生不 同的毒素，但是没有任何一种血清型APP能同时产生这三种A蹦毒素，如果要产生和分泌具有生物活 性的A雎毒素，需要相邻的按一定顺序排列的四个基l大】cABD组成的操纵子调控，其中A基凶编码毒 素结构蛋白，C基凶编码毒素激活蛋白，负责对毒素进行酞基化激活，B