高磷对乳鼠心肌细胞与生物学效应及聚磷菌与除磷作用.pdfVIP

㈣9㈣428㈣83Y1 摘要 摘要 磷是构成生物体并参与新陈代谢不可或缺的常量元素。磷广泛分布于自然 界，完全可以满足人体生理所需，一般不存在缺磷现象。但过量的磷可引起人 体内钙磷比例失调，导致骨质疏松、高磷血症等。过量的磷饮食还可增加慢性 肾病患者患心血管疾病的危险性，也可能增加正常人患心血管疾病的危险。在 慢性肾脏疾病(Chronickidney disease，Cr,D)患者中，高血磷引起的心血管钙化是 导致CKD患者死亡的主要病因。对于肾功能不全的肾病患者，严格控制饮食中 磷的摄取量是关键，这不仅可以延缓肾功能衰竭，还可以预防肾脏病变的发生。 从这些方面可以看出高磷对人和动物的健康有着重要的影响。然而不幸的是， 由于环境污染和污水排放，江河湖海磷污染的现象日益严重，高磷污染的水源 不仅产生了棘手的环境问题，而且严重威胁人类的健康。因而深入了解高磷对 一些细胞的生物学效应，探寻能有效处理高磷的微生物，有着重要的意义。 本论文通过观察不同浓度的高磷对乳鼠心肌细胞原代培养的影响，探讨了 高磷对乳鼠心肌细胞的生物学效应，包括高磷对乳鼠心肌细胞增殖抑制凋亡情 况和高磷对乳鼠心肌细胞钙化情况的研究，以了解高磷与乳鼠心肌细胞异位钙 化的关系，从而分析高磷对人和动物健康的影响。此外，从环境样品中分离筛 选了聚磷菌，并对其去除污水中高磷的效能进行分析，这对降低控制高磷引起 的水体污染及饮用水安全有着重要的意义。主要结果如下： 1．分别采用酶消化法和组织贴壁法分离乳鼠心肌细胞，并根据所得细胞的 活力和纯度，对两种方法进行了比较，从而确定适用的分离乳鼠心肌细胞原代 培养的方法。结果表明，两种方法均可得到乳鼠心肌细胞，有节律性搏动，免 疫组化染色胞浆呈褐色，细胞核呈蓝色，确定为乳鼠心肌细胞。两种方法得到 的心肌细胞活力均在95％以上，无显著差异(P0．05)。但酶消化得到的细胞 纯度较高，为97．638％，而组织贴块法为82．295％，酶消化法优于组织贴壁法， 二者有显著差异(PO．05)。通过分析不同因素对酶消化法分离的心肌细胞活力 的影响，得出最佳心肌细胞活力的条件：胰蛋白酶浓度为0．125％，pH在6．8～ 7．O，消化总的时间为40 rain。差速贴壁时间显示，贴壁120rain后心肌细胞纯 度可达95％以上。 2．比较了不同浓度高磷(3，6，9retool／L)对心肌细胞增殖抑制、钙沉积 摘要 d和第2 心肌细胞有着增殖抑制作用，与对照组相比，0 d时各浓度之间对乳鼠 心肌细胞增殖抑制无显著差异(Po．05)，从第4d起，所有高磷组细胞增殖抑 制率均高于对照组(Po．05)。钙沉积影响结果表明，与对照组相比，三个高磷 组钙沉积量均明显高于对照组(P0．05)，且钙沉积含量与作用时间及浓度有密 切关系。OPN含量及表达量含量结果显示，与对照组相比，三个高磷组OPN含 量及表达量显著升高(PO．05)，且随着时间和浓度的增加而明显增加。 ladder方法评价了高磷对乳鼠心肌细胞凋亡 3．根据c弱p嬲e．3活性和DNA 的作用。高磷组乳鼠心肌细胞2d后凋亡蛋白酶Caspase3含量增加，随着浓度、 mmol／L磷)的0．034 时间的增加而加增加，Caspase3含量由对照组(1 pmol／L 上升至9mmol／L磷的0．344 d后发现，高磷 pmol／L。在细胞培养后期，即培养6 mmol／L，9 组6 mmol／L培养的乳鼠心肌细胞产生凋亡片段。 4．从污水中分离到一株高效聚磷茵J．12，经生理生化以及16SrDNA鉴定 为节杆菌属的一个种(Arthrobacter