海洋酵母普鲁兰类酵母(Aureobasidium+pullulans)铁载体与研究.pdfVIP

海洋酵母普鲁兰类酵母(／4we拍as／d／伽p“／／“／a，7s)铁载 体的研究 摘要 从实验室海洋酵母菌种库的300多株海洋酵母中利用高氯酸铁检测的方法 筛选得到14株产铁载体的酵母，经过复筛得到一株铁载体产量较高的海洋酵 母菌菌株HN6．2，该菌株分离自中国青岛东风盐场近海表层海水。通过传统的 酵母菌种鉴定及分子生物学鉴定，最终鉴定该株海洋酵母属于普鲁兰类酵母 (么“阳D6傩础“聊p“刀“肠珊)。采用单次因子方法对HN6．2菌株发酵产铁载体培 养基及培养条件进行优化，得到最适产铁载体的培养基组分是(w／V)：蔗糖 3．0％，NHlN03O．3％，K2HP04 O．008％，ZnS04 O．3％，柠檬酸O．1％，MgS04 O．0002％，10InM L．Om，蒸馏水配制，初始pH调至6．2。最佳培养条件为：在 28℃和200印m下培养120h。在此最佳条件下培养，删6．2菌株的铁载体最高 产量可达到1．1mg／mL。 本文研究发现，产铁载体培养基中加入L．鸟氨酸后铁载体的产量明显增 加，而加入Fe”后，其产量明显减少。并且，从分子水平上检测L．鸟氨酸-N． 羟基化酶基因在不同条件下的表达量情况而得到同样的结果。 将HN6．2菌株在最佳培养条件下产生的铁载体进行不同的处理；采用牛津 杯法和菌落计数法检测铁载体的抑菌活性，结果显示，铁载体对海洋鳗弧菌 VP、海洋副溶血弧菌W二1和枯草杆菌具有明显的抑菌活性，并且对海洋鳗弧 菌VP的抑菌圈最大；而对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、梅奇酵母WCY、黑 曲霉和青霉没有抑菌作用。同时，发现Fe3+对铁载体的抑菌作用具有抑制作用。 实验还表明，该铁载体的热稳定性很强，对铁载体进行加热处理后，仍具有同 样的抑菌活性。 利用有机溶剂萃取法提取铁载体粗品，经HPLC半制备柱纯化，收集目的 峰。利用质谱法对此目的峰进行分析，根据该组分的分子离子峰，与已知结构 的铁载体比对，得到该铁载体的结构组分是异羟肟酸类Fusigen。 关键词：海洋酵母菌；铁载体；发酵条件优化；抑菌；纯化；结构模拟 lV Thesmdieson tllemarille siderophoreproducedby yeast HN6．2fi上NO．Z 4扰71PD6口sZ西扰，规矽“刀扰励万s4扰陀DD口SZdZ扰，规矽“ZZ扰Z口万S Abs订act oVer3 were 00 s仃ainsisolatedf．romdi丘．erentmariIleen、，的IⅡnen：tSscreened yeaSt formeir totalof14 g昀ills、Ⅳere abilit)，toproducesiderophore．Amongmem，a yeaSt fouIldto sn面nHN6．2wbjchwaSidemifiedtobe producesiderophore，aIld也eyeaSt waSfbulldto leVelofthe 么扰陀D6础f旃”聊p“刀砧胁力s producehigh siderophore．n坨 medium a11d cond“ionsfor optimal componemsgrowm siderophoreprodu