木瓜蛋白酶交联聚体的制备及性质.pdfVIP

V01．31 高等学校化学学报 No．9 CHlNESFUNIVERS兀1ES 20IO年9月 CHFMICAI．JOURNAI，OF 1774-1779 木瓜蛋白酶交联聚体的制备及性质 王梦凡，齐崴，苏荣欣，何志敏 (天津大学化工学院化学工程研究所，化学工程联合国家重点实验室(天津大学)，天津300072) 摘要采用交联酶聚体(cLEA8)技术制得了木瓜蛋白酶cLEA8，优化了制备条件．以纯乙醇为蛋白沉淀剂， 质馈分数40％戊二醛为交联剂，于4℃下对酶沉淀聚体交联16h；所得木瓜蛋白酶cLEAs的最适pH为6．O (游离酶最适pH=7．0)，最适温度范围由游离酶的80℃拓宽为50～80℃，热稳定性和溶液稳定性亦明显提 高；微观形貌分析证明木瓜蛋白酶cLEAs优良的催化效能及稳定性来自于cLEAs单元所具有的高比表面积 及单元内部多点共价同定的结合方式． 关键词交联酶聚体；固定化；木瓜蛋白酶；稳定性；形貌；集簇 中图分类号062；Q814．2文献标识码A 文章编号025l斯90(20lO)09一1774J06 生物催化过程因能耗低、效率高、环境友好，越来越受到工业生产领域的青睐．酶的固定化作为 生物催化过程的核心技术之一，在工业中的应用已有40多年的历史．包括载体吸附、共价连接、包埋 和交联在内的多种酶固定化方法已应用于数十种酶催化反应过程，具有较高的实用价值．交联酶聚 体‘1o(cross-linkedenzyme 制备的固定化酶全部由酶蛋白组成而无惰性载体，因此单位酶活较高．CLEAs的制备过程十分简便， J． 通过沉淀剂作用使游离态酶沉淀形成酶聚体，再利用双官能团交联剂将酶聚体交联即得到CLEAs【2 已有报道cLEAs在抗生素合成一。及化合物手性拆分。4j等领域表现出较好的催化活性和操作稳定性． 另一方面，虽然CLEAs具有简单的制备过程和优良的催化性能，但由于酶的种类、纯度和来源的差 别，不同酶的cLEAs往往在制备及性质上存在差异|5。J，这就需要根据不同酶及所催化的反应特点来 制备和使用CLEAs，才能将cLEAs技术应用于各类生物催化反应中． 木瓜蛋白酶(E．C．3．4．22．2)是一种巯基蛋白酶，它对蛋白质的水解反应具有良好的催化活性， 也可用于非水相短肽合成，在医药、食品和纺织等领域有着广泛的应用旧一0|．常见木瓜蛋白酶固定化 方法多为载体固定H卜13 J，载体制备过程复杂且成本高，在一定程度上限制了其生物应用．本文制备了 木瓜蛋白酶CLEAs，并对制备过程进行r优化，分析了制备条件对CLEAs酶活的影响规律；比较了游 离酶及CLEAs的最适催化条件和稳定性，阐述了CLEAs具有优良催化性能的原因；并对木瓜蛋白酶 cLEAs的微观形貌进行了表征，从微观角度探讨了cLEAs结构与性能的关系． 1 实验部分 1．1试剂与仪器 木瓜蛋白酶(广西南宁庞博牛物有限公司)；酪蛋白(SigIIla公司)；质量分数为50％戊二醛、乙醇、 丙酮、甲醇、硫酸铵、氢氧化钠和三氯乙酸等均为市售分析纯试剂(天津科威化学试剂有限公司)． U-2001型紫外分光光度计(HiLachi公司)；FREEzONE 收稿口期：2009一12一14． lOJcYBJc05100)资助． 联系人简介：齐崴，女，博士，教授。博士生导师，主要从事酶工程领域研究．E-rIlail：qiwei@tju．edu．cn 万方数据 No．9 王梦凡等：木瓜蛋白酶交联聚体的制备及性质 光粒度分析仪(英国Malvem公司)． 1．2实验方法 1．2．1 木瓜蛋白酶cLEAs的制备称取5．0mg木瓜蛋白酶，用1mL磷酸缓冲液(0．2moL／L，pH= min后向此 7．O)溶解，于室温下边搅拌边加入9mL一定浓度沉淀剂使游离木瓜蛋白酶完全沉淀，3