鸭呼肠孤病毒强毒株致鸭胚原代成纤维细胞凋亡的研究.pdfVIP

第24卷第3期 病 毒 学 报 V01．24No．3 OFVIROLOGY 2008 2 0 0 8年5月 CHINESEjoURNAL May 鸭呼肠孤病毒强毒株致鸭胚原代成纤维细胞凋亡的研究 张娜1，程安春h2，汪铭书h2，李传锋1，陈孝跃1 (1．四川农业大学动物医学院禽病防治研究中心，四川雅安625014} 2．动物疫病与人类健康四川省重点实验室，四川雅安625014) 摘要：通过光镜、电镜、DNALadder法、流式细胞术、荧光染色对鸭呼肠孤病毒(DRV)诱导鸭胚原代成纤维细胞 (DEF)凋亡情况进行检测。结果显示，光镜可见细胞形态学上出现细胞皱缩，染色质浓染边移；电镜观察到细胞胞 浆浓缩，细胞核染色质凝聚、部分形成凋亡小体；荧光染色结果显示，在感染后24h有激发绿色荧光的凋亡细胞出 现，随着时间的推移，激发红色荧光的死亡细胞数量增多；DNA 形条带；流式细胞术于感染后24h检测到凋亡细胞，其数量在72～96h达到高峰，144h开始下降。研究结果表明， DRV在DEF增殖的过程中具有诱导宿主细胞凋亡的作用。 关键词：鸭肿头出血症病毒；鸭胚原代成纤维细胞；细胞凋亡； 中图分类号：$858．32文献标识码：A 文章编号：1000-8721(2008)03—0213—07 鸭呼肠孤病毒(Duckreovirus，DRV)感染可引利于子代病毒扩散到相邻的细胞并且保证不受宿主 起一种新的鸭急性传染病，俗称鸭病毒性肿头出血 免疫系统的攻击[3]。所以研究病毒感染与细胞凋亡 viralswollenhead disease， 症(Duck haemorrhagic关系及凋亡的可能机制将有助于进一步认识病毒感 DVSHD)，该病发病急、传播快、发病率为50％～染性发生、发展及转归机制。为了解DRV是否具 100％，死亡率为40％～80％。临床和病理特征为有诱导宿主细胞凋亡的作用，本研究以DRV感染 发病鸭头颈肿胀、眼结膜充血(出血)、全身皮肤广泛 DEF为模型，应用光镜、电镜、荧光显微镜、DNA 出血、肝肿胀呈土黄色并伴有出血斑点、体温43℃ Ladder和流式细胞术对该病毒诱导的细胞凋亡及 以上、排草绿色稀粪等，给养鸭业造成了巨大经济损 其动态变化规律进行了系统检测，以期为阐明DRV 失‘11。 的致病机制提供有用的实验数据。 细胞凋亡(apoptosis)是指在一定的生理或病理 情况下，机体为维护内环境的稳定，通过基因调控， 材料与方法 激活内源性核酸内切酶，发生细胞自动死亡的过 程‘2|。多种细胞内部和外部的刺激都可以激发凋亡 1病毒DRV强毒株，由动物疫病与人类健康四川省重点 实验室分离、鉴定(经过病毒空斑试验纯化)[1]，该病毒已适 的发生。病毒感染是常见的导致细胞凋亡的重要因 应DEFt“，本次试验使用毒株为第5代细胞毒，对DEF细胞 素，病毒粒子为了在宿主细胞内复制和增殖必然参 的TCID5。为10“”／mL。 与了细胞本身的调节机制，为了控制宿主细胞，病毒 2细胞和培养基DEF细胞，参考文献[5]制备，细胞生长 本身包含了多种凋亡调节基因，有的基因阻止细胞 凋亡从而使病毒粒子的产量最大化或者有利于病毒 的持续感染，有的基因反而激活了细胞凋亡从而有 素的MEM。 3 DEF细胞的DRY感染按常规方法制备DEF细胞，在 收稿日期：2007—09—0