4个沉默鸡恒定链基因（Ii）慢病毒载体的构建及其效果比较.pdfVIP

鍪鼢k 雅髓擞鞲 燃 ： ． ． Onlinesystem http：／／wwwjabiotechorg … gy 盟竖 4个沉默鸡恒定链基N(／O慢病毒载体的构建及其效果比较 操储云 张大淦 余为一 陈芳芳 安徽农业大学 安徽省人兽共患病重点实验室，合肥230036 通讯作者，~ng7828887@126．CO／／／ 摘 要 恒定链 (invariantchain，Ii)是脊椎动物重要的免疫分子 ，在主要组织相容性复合体 (major histocompatibilitycomplex，MHC)Ⅱ类分子递呈抗原中起重要作用 。为研究鸡(Gusgallus)Ii与MHC11类 分子的关系，本研究构建了4个沉默^基因的慢病毒表达载体，并比较了其干扰效果。首先，用 自行设计 合成的4条鸡^基因干扰序列，分别经一步退火法获得双链短发夹RNA(shorthairpinRNA，shRNA)，并将 其用双酶切法插入慢病毒载体pLL3．7。4个构建的慢病毒重组载体经酶切和测序鉴定，分别命名为pLL一 ／／一shRNA236、pLL—Ii—shRNA376、pLL—li．shRNA527和pLL．／／．shRNA539。然后把这些重组载体分别转染 293T细胞(转染腺病毒E1A基因(1ethalinfectiongene)的人肾上皮细胞系)，进行病毒包装，再用包装的慢 病毒感染鸡源 巨噬细胞HD 11。结果表明，重组载体感染的293T细胞表达绿色荧光蛋 白，用包装的慢病 毒接种293T细胞，其滴度达2．2x107-5．1×10TU／mL；接种HD．11细胞的感染率均达到95％以上。最后用 荧光定量PCR方法检测其沉默鸡源巨噬细胞HD一11的鸡IimRNA的效率，与对照组相比，4个重组慢病 毒干扰效率分别为37％、52％、88％~H78％；其中，pLL一五一shRNA527的干扰效率最高。综上所述，本研究 从4个构建的重组载体中筛选出1个高效沉默鸡巨噬细胞^基因重组载体，并提示shRNA序列是决定沉 默特定基因的关键。实验结果为研究鸡^在递呈抗原中与其他免疫分子的关系提供了基础资料 。 关键词 恒定链基因 )，慢病毒重组载体，基因沉默，感染效率 Construction and Comparison ofFourLentivirusVector Silencing in Chicken(Gusgallus)InvariantChainGene(Ii) CAO Chu．Yun ZHANG Da—Gan YU Wei—Yi CHEN Fang—Fang KeyLaboratoryofZoonosesofAnhuiProvince，AnhuiAgriculturalUniversity,Hefei230036，China Correspondingauthor,fang7828887@126．com Abstract Invariantchain(Ii)iSanimportantimmunitymoleculeforvertebrateandplaysacriticalrolein majorhistocompatibilitycomplex(MHC)11presentingantigen．Tostudytherelationbetweenchicken(Gus gallus)liandMHCⅡmolecules．weconstructed4lentiviursvectorstargetingtosilencechicken^geneand comparedtheireffect．First，wedesignedandsynthesized4silencingchicken／／genesequencesando