Caveolin-1基因重组腺病毒表达系统的构建与鉴定.pdfVIP

第42卷第4期 广 州 医 科 大 学 学 报 Vo1．42No．4 2014年 8月 ACADEMICJOURNALOFGUANGZHOUMEDICALUNIVERSⅡY Aug．2014 · 论著 · Caveolin．1基 因重组腺病毒表达系统的构建与鉴定 李二毛 沈 飞 张焕玲 蔡文松 朱光辉 刘启才 徐 波 (广州医科大学实验医学中心，广东 广州 510182；广州市第一人民医院普通外科，广东 广州 510182) 摘要 目的：构建靶向肝脏的小凹蛋 白．1caveolin．1基 因重组腺病毒并对该表达体系进行鉴定。方 法：根据 GeneBanks中caveolin．1的序列设计引物，以大 鼠肝组织提取总RNA为模板，PCR扩增 caveolin一 1，并将caveolin．1序列克隆至pAdTrack—CMV质粒中，再与pAd—easy质粒进行同源重组构建重组腺病毒栽 体，利用脂质体法于293细胞 中进行包装重组腺病毒，RT．PCR检测 caveolin．1基 因的转录，Western blotting检测caveolin．1蛋白的表达情况。结果：PCR及Westernblotting检测结果表明成功构建出caveolin． 1基因重组腺病毒。结论 ：成功构建出caveolin．1基因重组腺病毒，为进一步研究caveolin．1基因在肝纤维 化及肝硬化疾病中的作用机制打下实验基础。 关键词 小凹蛋白．1；腺病毒；肝纤维化：大鼠肝组织 中图分类号：R363 文献标识码：A 文章编号：1008．1836(2014)04．0009．40 Constructionandidentificationofadenovirusexpressingcaveolin-1 LiErmao，ShenFei，ZhangHuanling，CaiWensong，ZhuGuanghui，LiuQicai，XuBo (ExperimentalMedicalResearchCenter，GuangzhouMedical 妇e ，Guangzhou510192，China；Department ofGeneralSurgery，GuangzhouFirstPeopleSHospital，Guangzhou510192，China) Abstract 0bjective：Toconstructandidentifythetargetliveradenovirusexpressingcaveolin-1．Methods： AccordingtoGeneBanksSequence，theprimersofcaveolin一1sequenceweredesigned，genomicRNA from rat livertissuewasextractedasatemplate，eaveolin一1wasarsplifledbyPCR，andthesequenceofcaveolin一1was clonedintopAdTrack—CMV plasmid，and homogonously recombinedwith pAd—easyplasmid to obtain the recombinna tadenoviralvector．Recombination adenoviruswasproducedin293cellsbylipofectaminersethod， trna scriptionofcaveolin一1and expression ofcaveolin一1were detected by RT—PCR and Western blotting， respectively．Results：Detection resultsofPCR and Western blotting showed that expressing eaveolin一1 recombination adenovirus were prosperity constructed． Conclusion： Successfully constructed caveolin一1 recombinationaden