基因工程菌发酵表达rhG-CSF的条件优化.pdfVIP

· 428 · 药学研究 ·JournalofPharmaceuticalResearch2014Vo1．33，No．7 · 工业药学 · 基因工程菌发酵表达 rhG—CSF的条件优化 王 娟，李希平 (鲁南制药集团股份有限公司，山东临沂273400) 摘要：目的 通过优化基 因工程茵EscherichiacoliBI221(DE3)Plys表达重组人粒细胞集落刺激因子(rhG— CSF)蛋 白的发酵工艺，提高蛋 白产量。方法 以100L规模发酵为例，从不同的接种量 (1％～10％)、加入 IPTG进 行诱导时的不同OD。。值，诱导表达后的不同溶氧可控制范围(20％ ～80％)等方面进行优化。用SDS—PAGE对 蛋白表达量进行检测。结果 优化后的方案为：采用5％的接种量，在0D 达到10～l5时加入诱导剂IPTG，诱 导起始后前20min控制溶氧在80％以下，20min后通过补加氨水控制 pH在 7．0左右，补料调节控制溶氧在20％ ～ 40％的范围内，诱导表达 5h后收集菌体。优化后的发酵方案极大提高了蛋白表达量。结论 rhG—CSF蛋白发 酵方案的优化对大规模生产具有重要的指导意义。 关键词：重组人粒细胞集落刺激 因子 ；发酵；溶氧；基因工程菌 中图分类号：Q812 文献标识码：A 文章编号 ：2095—5375(2014)07—0428—003 OptimizationofthefermentationofrhG —-CSFusingrecombinedstrain WANGJuan，LIXi-ping (LunanPharmaceuticalGroupCorporation，Linyi273400，China) Abstract：0bjective ToimprovetherhG—CSFproteinfromtherecombinedstrainEscherichiacoliBI21(DE3) Plys，thebatchfermentationconditionswasoptimesed．M ethods Wedeterminedtheinfluenceoftheparametersatsome crucialcontrolpoints，includingdifferentinoculationamount(1％一10％)，theOD6o0 offermentationculturewhenadding inducerIPTGandthedifferentconcentrationsofdissolvedoxygen(DO)(20％～80％)onthefinalproteinexpressionin 100Lbatchlevelfermentation．ASDS—PAGEwasusedtoanalyzetheproteinexpression．Results Theoptimizedfermen— tationconditionwasasfollow：inoculum quantity5％ ，IPTGshouldbeaddedwhentheOD600 ofculturereaches10～15，at thebeginningofinducingtheexpressionofobjectprotein，theDOconcentrationwascontrolledunder80％；Afterinducing 20min，thepH ofmedium waskeptataround7．0byaddingammonia，theDO concentrationwaskeptat20％ ～40％ ；The bacteriawascollectedafterinducing5hours．TheproductionofrhG—CSFwashigherafteroptimizingthefermentationcon— ditions．Conclusion Theoptimizedfermenta