日本血吸虫重组SjTsp2Sj29 ku蛋白疫苗对小鼠免疫效果的研究.pdfVIP

安徽医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Oct；49(10) ·1357 · ◇基础医学研究◇ 日本血吸虫重组SjTsp2／Sj29ku蛋白疫苗对小鼠免疫效果的研究 雷 娜 ，刘 淼 ，任翠平 ，刁玉洁 ，杨 菲 ，程海燕 ，沈际佳 摘要 目的 探讨 日本血吸虫重组Tsp2／~29ku表膜蛋 白 的76个国家流行，有6亿人受到威胁，2亿人受感 疫苗对小鼠的抗病免疫效果。方法 pet32afSjTsp2／Sj29ku 染，全世界每年约有数十万人死于该病…。我国尚 重组菌经异丙基硫代一B-D一半乳糖苷 (IPTG)诱导表达，制备 有454个血吸虫病流行县(市、区)，共有 31303个 纯化的重组蛋白。29只6周龄雌性昆明鼠随机分为蛋白疫 流行村，估计患者28万余例 J。血吸虫疫苗的研制 苗组、硫氧还蛋白组和空 白对照组，前两组各 10只，空白对 是防治血吸虫病的一种不可或缺的措施。迄今为止 照组9只。蛋白疫苗组，第一次免疫每鼠经背部皮下多点注 在基因工程疫苗(包括核酸疫苗)研究中，已筛选出 射用等体积弗氏完全佐剂乳化的50IxgSjTsp2／Sj29ku重组 表膜蛋 白，第 12、24天每鼠皮下多点再次注射用等体积弗氏 1O多个亚单位候选抗原。WHO／TDR确认了优先 不完全佐剂乳化的50 g该重组蛋白。硫氧还蛋 白组的免 研究 的 6种候选分子抗原分别是副肌球 蛋 白、 疫方法同蛋 白疫苗组。空白对照组用生理盐水代替蛋白，免 SmGST28、磷酸甘 油醛 异构酶、IrV-5、Sm23和 疫方法同前。末次免疫后第 l0天，每鼠经腹部皮肤感染 日 SmFABP_3J。既往研究 表明，以小鼠作为模型，评 本血吸虫尾蚴 (30±2)条。于感染 45d后剖杀全部实验小 价对谷胱甘肽 s转移酶、磷酸丙糖异构酶等抗原免 鼠，计算减虫率和减卵率。眼眶取血，分离血清，间接性 疫保护性效果仍不够理想。血吸虫虫体与宿主免疫 ELISA法检测 IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3和 IgM抗体亚型，同 系统直接接触相互作用，其表膜蛋 白更易刺激机体 时检测血清细胞因子 干扰素(IFN-^y)、白介素4(IL-4)水 产生相对应的免疫反应，提示血吸虫体被的表膜蛋 平。结果 pet32a／SjTsp2／Sj29ku菌经 IPTG诱导可大量表 白可以作为疫苗和药物靶点，故认为表膜相关抗原 达 ，经变性、复性获得纯化的日本血吸虫Tsp2／Sj29ku重组 研究在血吸虫病疫苗发展和免疫诊断方面起重要作 表膜蛋白。蛋白疫苗组与空白对照组比较，减虫率和减卵率 用 J。该研究选取 日本血吸虫四跨膜蛋白第二亲 显著升高(P0．05)。硫氧还蛋白组与空白对照组之 间比 较 ，减虫率和减卵率差异均无统计学意义(P0．05)。蛋白 水基团蛋 白(SjTsp2)与 Sj29ku表膜蛋 白胞外 区 疫苗组小鼠血清中IgG1、IgG2a、IgG2b显著高于空白对照组 (Sj29)，通过基因SOEingPCR技术，用疏水性多肽 (P0．05)，而 IgG3和 IgM较空 白对照组差异无统计学意义 (Gly4)3作为连接肽将二者进行连接，构建融合基 (P0．05)。蛋白疫苗组小 鼠血清 IFN-、IL-4细胞 因子显 因pet32a／SjTsp2／Sj29ku表达质粒 J，通过诱导表 著高于空白对照组 (P0．01)。结论 日本血吸虫 Tsp2／ 达，大量制备重组表膜蛋白，探讨其对小鼠抗血吸虫 Sj29ku重组表膜蛋 白疫苗对小 鼠抗感染有一定的保护性； 病的保护性免疫效果。 该重组蛋白免疫引起的是