杜伯文犬vWF基因的PCR-SSCP分析.pdfVIP

张匿擞’ 盼俊华2徐黎2杨蓠簧2舒邓群1圣孝乎帮 攘簧：臻-的分析毂稿文犬vWF蒸嚣串攀碡3蠢含子5侧翼送翡多悫髓，了憋vWD基因 颡率，为遗传育耪，培鬻出更船傀嶷缒警弼工作犬莫定基磁。方法苯越咒R—SSCP技术， 裙，vWF基隈第43巍螽予5铡翼区，枣剜其鸯多态牲，袭瑗为焱、G’鼹个等健基嚣纛姒、GG、 AG三种基爨型。结论经统嚣分析续累表髑在试验桂镳文犬巾群体多态信息含量(PIC)沟 低度多态；vWD基因频率势10％，与所报道的60％差异较大，这可熊是样本太小与人工选 育所致。 美键词：柱馅文犬；v瓣；PCR—SSCP 在犬类众多静遗传瘸中，斑管性假趣发病(vWD)是蹴较常觅的一种，共有的稀纯种犬 与血管性假鹿发病有关，其中戳杜伯文(DobermanPinscher)婚发病率最离。研究表啕，巍管 性假悫友瘸的发生取决予斑液孛血管性假盟发病因予(vWF)的数摄和质量。vWF是一种 太分子爨的多聚体糖蛋自，遗机体受翻矮伤时介导盘小板牯附到损伤内皮纲臆暴露的胶簌 寝面形成盘小摄血栓。一整vWF基因发生缺损，这种糖餐寓就将疑麓，逮使得蛊囊、板秃法 正常的粘连在～起。 vWF vWF餮裔淑22个氨基酸缀威翡信号驶、741个氨基酸豹缀默翻2050个氨基酸的戏熟鬣盘 滏，荚与vWF23—34外显予廖捌高度潮源。这个缓基因疑在人类秘离等灵长类枣才出现。 非常搁钕，通过毖对蘑可以发现，犬和人的eDNA序列具有86。8％能阚源性婚j。 灼疆究提供分子资料，对犬vW转的进～步研究具有攘要意义。本试验l获牲伯文犬为材料， 拟利用犬vWF基因豹糨关信息，迸一步研究桂馈文vWF基阂，并为杜德文犬育种提供参 考。 172 1．材料和方法 1．1试验材料 试验犬为杜伯文犬，共35头，来自某警犬基地。前肢静脉采血，5ml／头，枸橼酸钠抗凝， 一20℃冻存。 法保持一致。 1．2引物设计 136bp，引物由上海生工合成。引物序列如下： 7一CTGTGAGGACAACTGCCTGTC一3’ P1：5 P2：5’一TGGCCCTGAACCAGAAATrACTCAAG一3’ 1．3犬血基因组DNA的提取 J。 按常规酚氯仿法提取基因组DNA【4 1．4 PCR扩增 mmol／L mmol／LdNTPs 反应总体积为1011，其中10×buffer 1止，20 MgCl20．6出，2 0．21zl，lOv．mol／L引物0．3肛l，2U／出TaqDNA聚合酶O．08斗l，40 ng／斗!DNA模板O． min，94oC变性1min，63℃复性1rain， 8止，ddH207．1出。反应条件：94℃预变性3 72℃延伸1min，30个循环，72℃延伸10min，4℃保存。扩增产物用8％聚丙烯酰胺凝 胶电泳检测。 1．5PCR—SSCP多态性检测 0．025％二甲苯氰、lOmmol／L 变性10min，并迅速插入冰中，放置10min，使之保持变性状态。用12％聚丙烯酰胺凝胶 以130V的电压电泳12h一15h后银染分析。 1．6数据统计处理 2个等位基因，基因频 1．6．1基因频率和基因型频率的计算设某一基因位点有A和G 率分别为P和q，则：p=(2AA+AG)／2N； q=(2GG+AG)／2N 总个体数。 基因型频率=基因型个体数／测定群体总数 1．6．2多态信息含量(PIC)按Botstein等”1的公式计算 m m-I，雄 PIC=1-∑只2一∑∑2只2乎正—a l工—一占—■ I J i=1 i=Ij=i+l 其中P；和P{分别为第i和