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7 单 克 隆 抗 体 通 讯 第6卷 第4期 1990年12月 Journalof MonoclonalAntibody Vo1．6 No． 4 Dec． 1990 ABC免疫转印技术在分析抗肿瘤McAb 识别抗原特性中的应用 R罗2 兰 兰_— 马士英 安天叉 刘民培 (沈 军医总医院医学实验科，沈 11001s) 摭 要 利甩ABC 免疫转印技术分析一组共 l6个抗 大肠癌 McAbs识别抗原的特 性，效果满意 。谊法不需分离纯化抗原和制备腹水，使用杂交瘤培 养上清液 即可得 到清晰，准确 的识别抗原区带，背蒂浅淡，用来分析识别抗碌分子量蕊理化性质 ， 特 异性强 、重 复性好 ．敏 感座 高。可检测 的最 小肿 瘤抗 原蛋 白量为 1．25×10一rag， 明显优于 PAP免疲转 印和 问接酶免疫转 印法 。本文提示，ABC免疫转印是分析复 杂而微量 的抗 原的有效方法。 关麓词 ABC免疫转印 抗体 涛 差如霹； 免疫转印技术 (Ib，tmmunoblot)既保 次，收集通过 120目铜阿的匀浆超声粉碎30 留了凝胶 电泳的高分辨率，叉具有免疫检测 min，4℃ 10000g离心30rain，取上清用 的高敏感性 ，近年来 已成为从分子水平研究 “Lowry” 法确定其蛋 白含量，电椿茼用样 抗 原性质的重要手段 _I 。目前 Ib中常采 品处理液作适当稀释 煮沸 3min 用的免疫检测方法有放射免疫 自显影和免疫 f．2 抗大肠癌McAbs 由本 室 制备的一组 酶染色两种 后者有快速 ，简便 ．无放射性 共l6个McAbs，分 命名为SC2，SC3、SC 同位素污染的优点，但肿瘤抗原含量板微， 3A 、SC3B．SC4，SC6、SC7．SC7A 、SC8， 用一般免疫酶染色常不曷成功 。为此，我们 SCIO SC 11、SC12 SC 13，SC13A ，SC 将生物素一亲和索这一生物放大系统 引入 Ib I5、SC16(” “ 中 (ABC—tb)，分析了一组共 l6个抗太肠 t．3 免疫碡染色试剂 A13C 试剂盒 (Vec— 癌McAbs识别抗原的特性，效果满意， for)。PAP试 剂 盒 (北京生物制品所 )。 辣根过氧化物酶标记兔抗 鼠 IgG (第 四军医 1 材料和方法 大学免疫学教研室 ) f．4 SDS一聚丙燔醺胺凝胶 电泳 (SDS—PA 1．1 大肠癌翅奴可港性抗 原 (SCC—Ag)锎 GE) 采用 Laemali【 不连续缓冲系统 。 备 取新鲜人大肠癌组织，去除坏死部分， 分离胶浓度为 7．5 ，pH8．8，浓缩胶浓度 洗净剪碎，每克湿 组 织 加 4ml缓冲液 (10 为 4 ，pH6．8。稳压i00V，电泳90rain。 mmolTris—HCI 2mmolCaC! pH7． 4)， 标准分子量蛋 白 (200kD：Sigma，低分子： 用高速组织捣碎机制成 匀浆 ，反复凉融 3 上海东风生化试剂厂 )与 SCC—Ag在 同一块 凝胶上进行 电泳 。 现二医大长征医浣实验科 l，5 转印电渌 参照 Tow